绿色荧光蛋白(GFP)技术在细胞生物学研究中的应用.docVIP

10 GFP报告蛋白用于细胞活体分离与纯化 ? 利用细胞表面标记，通过流体细胞分光光度计或荧光活化细胞筛选仪(FACS， 可以分离与纯化特殊类型细胞，对分析cDNA文库、研究基因的细胞发育或 组织专一性表达十分重要[26,27]。利用GFP融合蛋白为细胞表面活体荧光 标记，通过筛选已经获得GFP表达的大肠杆菌、人体肾细胞和猿猴COS-1细 胞特殊类型。Sheen J等在GFP转染玉米原生质体的流体参数分析中发现， 转染15～18小时后，对照中只有一类细胞丛，表现较强红色荧光和微弱的绿 色荧光，并且细胞间荧光强度相当一致，没有明显差异。而GFP转染的原生 质体中出现两类细胞丛，第一类与对照相似，呈现红色荧光，约占细胞总数 66.3%；第二类细胞丛呈现绿色荧光，荧光强度是对照的74倍。因此，用流 式细胞分光光度计或荧光活化细胞筛选仪(Epics Elite, Conlter Electronics,Miami FL, USA很容易将两类细胞分离开来。原生质体可以来 源于不同类型的组织细胞原生质体表达的GFP信息，即可代表某种组织的信 息。采用发育专一性启动子构建GFP表达载体，可以将这些具有基因表达特 异性的细胞类型分离出来。利用不同表达文库转染原生质体，通过流体参数 分析和细胞分类，可以揭示在信号传导途径中所包含的许多反方活化因子 (trans-activating fector