《DNA重组技术应用基本工具》选修.pptVIP

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实例: 1、下列关于限制酶的说法正确的是( ) A.限制酶广泛存在于各种生物中,但微生物中少 B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D.限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 B Q:要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口?可产生几个黏性(平)末端? 要切两个切口,产生四个黏性(平)末端。 Q:如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割,会怎样呢? 会产生相同的黏性(平)末端,然后让两者的黏性(平)末端黏合起来,就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? 1、种类: 2、作用部位: 两类 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA连接酶可把切下来的DNA片段拼接成新的DNA。即:把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来实质是把脱氧核糖和磷酸连接起来. 二、 DNA连接酶----分子缝合针 ③类型: 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 二、 DNA连接酶----分子缝合针 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来, E·coli DNA连接酶        或T4DNA连接酶 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来,但效率较低 T4DNA连接酶 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别 相同点 寻根问底 DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么? 1)只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上,形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 Q:外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)? 1.作用: 2.种类: 质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒等。 将外源基因送入受体细胞。 三、基因进入受体细胞的载体--分子运输车” 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒:常含有抗药基因如:四环素的标记基因。(质粒的存在与否对受体细胞生存没有决定性作用,但复制只能在受体细胞内完成) 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌染色体(即拟核DNA)之外,并且具有自我复制能力的双链环状DNA分子 质粒是基因工程最常用的载体 1.假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样? 2.作为载体没有切割位点将怎样? 3.目的基因是否进入受体细胞,你如何去察觉? 4.如果载体对受体细胞有害将怎样? 作为运载体必须具备的条件 作为运载体必须具备的条件 1.能够在受体细胞中自我复制并稳定地保存。 2.具有一个或多个限制酶切点,以便与外源基因连接。 3.具有某些标记基因,便于进行筛选。 4.必需是安全的,不会对受体细胞有害。 注意: 真正用作运载体的质粒都是人工改造过的 质粒的特点: 1、细菌染色体外双链环状DNA分子 2、能自我复制并在受体细胞中稳定存在 3、有一个或多个限制酶切点 4、有特殊的遗传标记基因 注意: 真正用作运载体的质粒都是人工改造过的。 注意:这两条DNA分子的碱基对不是随意乱写的。 一、每个DNA分子上的两条链上的碱基要互补配对; 二、每个DNA分子中每条链都存在一个G-A-A-T-T-C的碱基序列,也就是说是EcoRI限制酶的识别序列,并存在G-A的切割位点。 四、模拟操作:重组DNA分子的模拟操作 小结: 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工具 具备的 条件 结构简单,大小适中 能在宿主细胞中自 我复制并稳定存在 具一个多个限制酶切位点 具标记基因 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 1、关于限制酶的说法中,正确的是( ) A、限制酶是一种酶,只识别GAATTC碱基序 列 B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键 C.限制酶一般不切割自身的DNA分子,只 切割外源DNA D.限制酶只存在于原核生物中 课堂练习 2、DNA连接酶催化的反应是( ) A.DNA复制时母链与子链之间形成氢键 B.黏性末端碱基之间形成氢键 C.两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接 D.A、B、C都不正确 3、作为基因的运输工具——载体,必须具备的条件及理由是( ) A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制,以便提供大量的目的基因 B、具有多个限制酶切点,以便于目的基因的表达 C.具有某些标记基因,以便为目的基因的表达提供条件 D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存,以便于进行筛选 4、质粒是基因工程最

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