细菌真菌放线菌培养基配方.pdfVIP

1 。 一． 细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的 培养基 , 肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和 NaCl。 肉膏蛋白胨培养基 1. 药品比例 ： 牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，Nacl5g ，琼脂 15～20g，水 1000mL， PH7.4～7.6 2. 实验器材： 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、 3 2 4 2 4 2 1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO、NaCl、K HPO·3H O、MgSO·7H O、 4 2 FeSO ·7HO、4.5mL 无菌水 6 管，10%酚液，49.5mL 无菌水 ( 带玻璃珠 )1 瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃 棒、天平、称量纸、牛角匙、 pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、 纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台 . 3. 配置方法 （1）称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大 烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋 白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 （2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石 棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至 所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中， 1 1 再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补 足所失的水分。 （3）调 pH：检测培养基的 pH，若 pH偏酸，可滴加 lmol/L NaOH， 边加边搅拌， 并随时用 pH试纸检测， 直至达到所需 pH范围。若偏碱， 则用 lmol/L HCl 进行调节。 pH 的调节通常放在加琼脂之前。应注意 pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 （4 ）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用 4 层纱 布趁热过滤，以利培养的观察。但是供一般使用的培养基，这步可省 略。 （5）分装：按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角 瓶内。分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。 分装量：固体培养基约为试管高度的 l/5 ，灭菌后制成斜面。分 装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。 半固体培养基以试管高度 的 1/3 为宜，灭菌后垂直待凝。 （6）加棉塞：试管口和三角瓶口塞上用普通棉花 ( 非脱脂棉 ) 制 作的棉塞。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留 缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约 3/5 塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通 气，则可用 8 层纱布制成通气塞。 有时也可用试管帽或塑料塞代替棉 塞。 （7）包扎：加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层报 纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应以 5 支或 7 支在一起，再于棉塞外包一层牛皮纸，用绳扎好。然后用记号 笔注明、培养基名称、组别、日期。 1 1 （8）灭菌：将上述培养基于 121.3 ℃湿热灭菌 20min。如因特殊 情况不能及时灭菌，则应故人冰箱内暂存。 （9）摆斜面：灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一 根长木条上，并调整斜度，便斜面的长度不超过试管总长的 1/2 。 （10）无菌检查：将灭菌的培养基放入 37℃温箱中培养 24～48h， 无菌