五模块生物检测技术讲解材料.pptVIP

第五模块 生物检测技术;;复习提问;新课大纲; ;二、热原检查法;;;;5.除去方法;;7.具体 步骤;;智能热原仪;;温度探头;本法是利用鲎试剂来检测或量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素（单位以EU表示），以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法。; 系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来检测或 半定量内毒素的方法。 分为浊度法和显色基质法。 ①浊度法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量的方法。可分为终点浊度法和动态浊度法。 ②显色基质法系利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物释放出呈色团的多少而测定内毒素含量的方法。可分为终点显色法和动态显色法。;内毒素与鲎试剂起反应产生凝胶，观察到浑浊。;①来源：G-细胞壁外膜上的脂多糖（LPS）成分，所以内毒素是化学成分不是简单的生命体，所以灭内毒素时应与其他成分区分。;　　　　　 ;③特点：根据其特殊结构，疏水基团易粘合在容器的器壁，而在水中的浓度就变低，另一方面疏水端相连结后，亲水端再与别的疏水端相连而成大的集团，使其在水中的分布不均匀，所以药典规定在使用时要经过振荡及混旋15分钟，并立即做下一步操作，但这种现象只限于人工提纯品。;④与热原的关系：广义热原包括内毒素、生物酶、蛋白质、化学物质（后三种成分也有致热作用，但不引起器质性的病变），而狭义的热原就等于内毒素（引起器质性的病变）。所以药品检测时一般认为没有内毒素，合格时，热原检测也合格。;⑤分类： 分国家标准品：（简写RSE或NSE）效价：9000，单位Eu,由中检所生产，代号981就是指98年1月生产。 和工作标准品：（CSE和WSE）效价：100－200，也有50或70，单位Eu，到中检所购买，是法定试剂。; ; ; ; 凝胶法的灵敏度低：0.5 Eu/ml，规格：0.1 ml 定量法高，0.06Eu/ml，工艺在凝胶法基础上发展而来，0.6 ml，也有1.2和3.1 ml。;内毒素小于0.03 Eu/ml的无菌注射用水，鲎试剂反应的PH：6－8，而工业生产要求为PH：5－7，所以不能以企业生产的灭菌注射用???来作为检查用水，必须是中检所指定生产。药典规定凝胶法小于0.03 Eu/ml，定量法小于0.005 Eu/ml，买时要配套，与鲎试剂买一个厂家生产的。;内毒素检查法; 2.定量分析方法 ;OD：;3.实验前期工作 ;⑴稀释内毒素标准品 ⑵制备鲎试剂 ⑶制备标准曲线 ⑷生成标准曲线 ;⑴稀释内毒素标准品 0.2ml 0.2 0.2 0.2 1.8ml水 1.8 1.8 1.8 100Eu/ml 　10 　1 0.1 0.01;;⑷生成标准曲线 待最后一个浓度点的反应曲线超过0.02限值后，用鼠标点中“手动停止检测” 点击“生成标准曲线”　;⑸样品稀释与加样 样品四个浓度稀释　　　　　8个阳性管 （如：40.80.160.320） 平行2个，共8个管;　　 　阳性对照：找出最佳稀释倍数 　算出头孢曲松钠内毒素浓度 为 0.065Eu/mg, 小于限值0.2Eu/mg。;本课小结;课后习题;Thank you!