基因工程名词解释COS序列DNAcloningVector目的基因.docVIP

第十四章 基因工程 名词解释 COS序列 DNA cloning Vector 目的基因 Cosmid（柯斯质粒/粘粒） 感受态细胞 转座 YAC载体 Restriction endonuclease 蓝白斑实验 填空 1. 设法将众多的转化菌落和菌斑区分开来，并鉴定哪一菌落或噬菌斑所含重组DNA分子确实带有目的基因，这一过程即为______________或选择， 有直 接选择法和非直接选择法,直接选择法主要有______________、______________、______________等。 2. 一个完整的基因克隆过程包括：目的基因的获取，______________的选择与改造，______________的连接，重组DNA分子导入受体细胞，筛选出含感兴趣基因的重组DNA转化细胞。 3. 科学家感兴趣的外源基因又称______________，其来源有几种途径：化学合成，酶促合成cDNA， 制备的基因组DNA及______________技术。 4. 通过自动获取或人为地共给外源______________， 使细胞或培养的受体细胞获得新的______________，这就是转化作用。 5. 限制性核酸内切酶是一类识别______________的______________核酸酶。 6. 由______________和______________介导的基因移位或重排，称为转座。 7.根据采用的克隆载体性质不同，将重组DNA分子导入细菌的方法有______________、______________及感染。 问答 何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识别DNA序列的结构特点。 何谓基因克隆？简述基因克隆的基本过程。 何谓目的基因？写出其主要来源或途径。 有哪些方法可获得目的基因？ 试述载体的种类和特征。 参考答案 名词解释 噬菌体λ为线性双链DNA病毒，野生型的λ’ 噬菌体其基因组两端各有12个核苷酸的5’突出，碱基互补，为极有效的粘性末端，称为COS序列。 DNA克隆，就是应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质——同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA 与载体DNA 结合成一具有自我复制能力的DNA 分子——复制子， 继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子，即DNA克隆，又称基因克隆、重组DNA或基因工程。 载体，即基因载体，或称克隆载体，是在基因工程中为“携带”感兴趣的外源DNA、实现外源DNA 的无性繁殖或表达有意义的蛋白质所采用的一些DNA分子，具有自我复制和表达功能。其中，为使插入的外源DNA 序列可转录、进而翻译成多肽链而特意设计的克隆载体又称表达载体。克隆载体有质粒DNA、噬菌体DNA和病毒DNA， 它们经适当改造后仍然具有自我复制能力，或兼具有表达外源基因的能力。 应用重组DNA技术有时是为分离、获得某一感兴趣的基因或DNA 序列，或是为获得感兴趣基因的表达产物——蛋白质。这些感兴趣的基因或DNA序列就是目的基因，又称目的DNA。目的DNA有两种类型，即cDNA和基因组DNA. COS序列与质粒载体的结合产物，可作为克隆大片断基因组 DNA的一种载体。如：pJB8。 经用低温CaCl2处理，使之易导入外源 DNA分子的受体细胞。 在基因组内有些基因可以从一个位置移动到另一位置。这些可移动的DNA序列包括插入序列和转座子。由插入序列和转座子介导的基因移动或重排现象称为转座。 即酵母人工染色体，用于大片断DNA的克隆。 限制性核酸内切酶，就是识别DNA 的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。限制性核酸内切酶存在于细菌体内，与相伴存在的甲基化酶共同构成细菌的限制——修饰体系，限制外源DNA、保护自身DNA, 对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。限制性核酸内切酶分为三类。重组DNA 技术中常用的限制性核酸内切酶为II类酶。 大肠杆菌的lacZ基因常被用作为选择标记，此基因编码半乳糖苷酶，能分解X-gal，使之由无色转变为蓝色。若在含有X-gal的培养基中，在乳糖操纵子诱导物IPTG的作用下，细菌合成半乳糖苷酶，分解X-gal，此菌落成为蓝色，若lacZ基因被外源DNA片断插入而破坏， 则不能制造半乳糖苷酶，菌落位白斑。 填空 筛选；抗药性标志选择；标记补救；分子杂交法 载体；目的基因与载体 目的基因 PCR DNA 遗传表型 DNA特异序列 内切 插入序列 转座子 转化 转染 问答 解释限制性内切核酸酶；酶识别DNA位点的核苷酸序列呈回文结构。 基因克隆的概念；以质粒为载体进行DNA克隆的过程（为例）。包括：目的基因的获取，基因载体的选择与构建，目的基因与载