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ELISA试验主要操作步骤的技术要求和注意事项
试剂的准备 1.放冰箱内保存的试剂、在使用前应先恢复到室温。
2.仔细检查试剂各组分是否变质
3.保存试剂的冰箱应定期检查其贮存温度（正常为2-8℃），并尽量避免冰箱频繁开关
溶解冻干品，加样品稀释液后，保证充分溶解，反复颠倒。
三．加样 1． 严格按照说明书要求，按规定的量和顺序进行
2．? 使用的微量加样器应注意保养并定期校正
3．? 加样前应使溶液充分混匀，并将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，注意不可出现气泡。加样前要看移液器的液面是否平齐。
4．? 加样时避免样本溅出，如有样本溅出孔外时，应用吸水纸轻轻拭干，并做相应记录
5．? 加样后微孔板应及时温育，尽量缩短加样后温育前的等待时间
6. 如果加样枪漏气以至于加样的量不够，不能用枪吸出再加。避免污染整条甩掉再重新加。
四．温育
1．? 严格按照说明书要求，按规定的温度和温育时间进行
2．? 为避免孔内液体蒸发，可用封板胶将ELISA板面密封后进行温育
3．? 温育时尽量少开启恒温箱门，不能人为缩短或延长温育时间
五．洗板 1．? 洗板时需保证微孔板平放，将洗涤液注满各孔，但尽量避免漏液溢液现象 2．? 每次洗板的液体残留量不宜过多，洗完后，应将微孔板在吸水纸上轻轻拍干。 3．? 配置洗涤液需要新鲜无污染的蒸馏水或去离子现配现用。
六．显色 ? 1．?不使用过期显色剂，肉眼可见浅兰色的TMB显色剂不能使用。 2．? 显色剂避免在空气中暴露时间过长。
3．? 加显色剂尽量避免溅出孔外。
七．终止显色完后应及时终止，加终止液时避免出现气泡
八．结果判断 1．? 酶标仪读数时应保证微孔板底部清洁，定期清洗酶标仪滤光片。
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