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第二十一章 基因诊断与基因治疗 基因诊断与基因治疗能够在比较短的时间从理论设想变为现实，主要是由于分子生物学 的理论及技术方法，特别是重组 DNA 技术的迅速发展，使人们可以在实验室构建各种载体、 克隆及分析目标基因。所以对疾病能够深入至分子水平的研究，并已取得了重大的进展。因 此在 20 世纪 70 年代末诞生了基因诊断 (gene diagnosis)；随后于 1990 年美国实施了第一个基 因治疗 (gene therapy)的临床试验方案。 可见， 基因诊断和基因治疗是现代分子生物学的理论和 技术与医学相结合的范例。 第一节 基因诊断 一 . 基因诊断的含义 传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为依据，如患者的症状、血尿各项指标的变 化，或物理检查的异常结果，然而表型的改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生 的一定时间后才出现，因此常不能及时作出明确的诊断。现知各种表型的改变是由基因异常 造成的，也就是说基因的改变是引起疾病的根本原因。基因诊断是指采用分子生物学的技术 方法来分析受检者的某一特定基因的结构（ DNA 水平）或功能（ RNA 水平）是否异常，以此 来对相应的疾病进行诊断。基因诊断有时也称为分子诊断或 DNA 诊断 (DNA diagnosis) 。基因 诊断是病因的诊断，既特异又灵敏，可以揭示尚未出现症状时与疾病相关的基因状态，从而 可以对表型正常的携带者及某种疾病的易感者作出诊断和预测，特别对确定有遗传疾病家族 史的个体或产前的胎儿是否携带致病基因的检测具有指导意义。 二 . 基因诊断的原理及方法 （一）基因诊断的原理 疾病的发生不仅与基因结构的变异有关，而且与其表达功能异常有关。基因诊断的基本 原理就是检测相关基因的结构及其表达功能特别是 RNA 产物是否正常。由于 DNA 的突变、 缺失、插入、倒位和基因融合等均可造成相关基因结构变异，因此，可以直接检测上述的变 化或利用连锁方法进行分析，这就是 DNA 诊断。 对表达产物 mRNA 质和量变化的分析为 RNA 诊断 (RNA diagnosis) 。 1 （二）基因诊断的方法 基因诊断是以核酸分子杂交 (nucleic acid molecular hybridization) 和聚合酶链反应（ PCR） 为核心发展起来的多种方法，同时配合 DNA 序列分析，近年新兴的基因芯片可能会发展成为 一种很有用的基因诊断方法。 1. DNA 诊断 常用检测致病基因结构异常的方法有下列几种。 ⑴ 斑点杂交：根据待测 DNA 样本与标记的 DNA 探针杂交的图谱，可以判断目标基因 或相关的 DNA 片段是否存在， 根据杂交点的强度可以了解待测基因的数量。 ⑵ 等位基因特异的寡核苷酸探针（ allele-specific oligonucleotide probe, ASO probe ）杂交： 是一种检测基因点突变的方法，根据点突变位点上下游核苷酸序列，人工合成约 19 个核苷酸 长度的片段，突变的碱基位于当中，经放射性核素或地高辛标记后可作为探针，在严格杂交 条件下，只有该点突变的 DNA 样本，才出现杂交点，即使只有一个碱基不配对，也不可能形 成杂交点。一般尚合成正常基因同一序列，同一大小的寡核苷酸片段作为正常探针。如果受 检的 DNA 样本只能与突变 ASO 探针，不与正常 ASO 探针杂交，说明受检二条染色体上的基 因都发生这种突变，为突变纯合子；如果既能与突变 ASO 探针又能与正常 ASO 探针杂交， 说明一条染色体上的基因