实验四细胞免疫.pptxVIP

实验四 外周血单个核细胞的分离 外周血单个核细胞的分离（Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞） 原理： 外周血各种血细胞的密度不尽相同，利用淋巴细胞分离液（Ficoll）作密度梯度离心，使一定比重的细胞群按相应密度梯度分布，从而将各种血细胞加以分离。 血液成分 红细胞 T细胞 血液 血小板 淋巴细胞 B细胞 白细胞 单个核细胞 NK细胞 （PBMC） 单核细胞 多形核细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 中性粒细胞 血液中各个成分密度 红细胞 1.093g/ml 多形核细胞 1.092g/ml 单个核细胞 1.076g/ml（1.075~1.090） 血小板 1.030~1.035g/ml Ficoll液 1.077±0.001 聚蔗糖+泛影葡胺 方法：1、抽取外周血1ml+等量Hank’s液混匀放入A管 2、取Ficoll液2ml加入B管 3、吸管吸取A管内血沿倾斜的B管管壁缓慢加入 4、水平离心，室温，2000rpm，20min 5、吸取PBMC层移入另一试管 6、加足量稀释液充分洗涤，弃上清 注意： 1、在Ficoll液上加稀释外周血时，应缓慢加，两者之间要形成一个清晰的界面 2、水平离心，室温，缓升缓降 3、吸取单个核细胞层时，应避免吸出过多的上清液或分离液而导致血小板的污染 谢 谢！