凝胶过滤及离子交换层析介质.pptxVIP

第九章 凝胶过滤及离子交换层析介质;凝胶过滤法又称为分子筛层析、凝胶层析或排阻层析,是利用凝胶的网状结构根据分子大小进行分离的一种方法。 凝胶过滤所用的介质是由交联葡萄糖、琼脂糖或聚丙烯酰胺形成的凝胶珠。 凝胶珠的内部是多孔的网状结构。单个凝胶珠本身象“筛子”,不同类型凝胶的筛孔的大小不同。;凝胶过滤示意图;;凝胶过滤层析过程示意图;凝胶过滤的基本原理：含有尺寸大小不同分子的样品进入层析柱后，较大的分子不能通过孔道扩散进入凝胶珠体内部，较小的分子可以通过部分孔道，更小的分子可通过任意孔道扩散进入珠体内部。从而使得小分子移动最慢,中等分子次之，不同分子尺寸的分子先后顺序不同流出层析柱，达到分离的目的。;1、常见凝胶种类：;2、凝胶介质应具备的条件;凝胶装置图;3、凝胶过滤的优点;4、色谱柱的重要参数;(2) 峰洗脱体积：指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液的体积，常用Ve 表示。 当使用样品的体积很少时，（与洗脱体积比较可以忽略不计），在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。 当样品很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点（或半高处）。 ;5、凝胶过滤的用途;6、流动相;1) 常用磷酸盐和硫酸盐进行离子强度的调节;一般来说，生物化学领域常采用水溶性溶剂，称为凝胶过滤色谱； 在