流动相色谱柱.pptVIP

HPLC的分离类型 正相色谱 (NP-HPLC) 反相色谱 (RP-HPLC) 反相离子对色谱 (RPIC) 离子交换色谱 (IEC) 空间排阻色谱 (SEC) 手性化合物分离模式(Chiral sepration mode) 1.马来酸2.苯肾上腺素3.盐酸去甲麻黄碱4.萘唑啉5.非那西汀6.吡拉明 流动相 流动相选择注意事项： 纯度：采用“ HPLC ”级溶剂 避免使用会引起柱效损失或保留特性变化的溶剂 对试样有适宜的溶解度 溶剂粘度要小 与检测器相匹配 流动相配制时的顺序 溶剂前处理 过滤：0.45um或更小孔径滤膜 目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤其是使用无机盐配制的缓冲液。 过滤膜种类 水系过滤膜 有机系过滤膜 溶剂前处理 脱气 目的：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡 一般混合溶剂中能容纳的空气量往往要比单个溶剂所能容纳的空气总量要小 输液泵 输液泵控制方式： 恒流控制 恒压控制 进样器 自动进样器 手动进样器 原理：（六通阀） 注入方式： 1）全量注入 2）部分注入 色谱柱 1）柱压低于150kgf/cm2（15cm色谱柱） 2）柱温在40℃左右,一般不超过50 ℃ 3）一般ODS柱流动相PH使用范围为2～7.5 CAPCELL PAK C18 2-10 Asahipak ODP-50 2-13 4) 流动相有机溶剂比例过低, 柱效下降快 CN柱的使用注意点 某些化合物在CN柱上色谱保留行为特殊 一般正相和反相分析条件ID:4.6mm柱长:根据样品基质的复杂程度,选择150mm或250mm填料粒径: 5 um一般分析条件:流速 : 0.8 - 1.5 ml/min柱温: R.T. or 40oC 血浆样品分析条件样品处理:HClO4沉淀蛋白色谱条件:色谱柱:Shimadzu ODS,5u,ID 4.6*150mm预柱:Phenomenex C18 5u,4.0mmL*3.0mm ID流动相:CH3OH-0.01M NaH2PO4(含1mM十二烷基硫酸钠)(40:60)流速:1.0ml/min柱温:350C检测波长:232nm 三维谱图 时间 波长 吸光度 色谱 光谱 检测器 原理：连续测定流通池中溶液折射率变化以测定 试样各组分浓度。 优点：通用型检测器 缺点：1）对温度和压力变化敏感 2）不能用于梯度分析 示差折光检测器 糖的色谱图 Analytical Conditions Column : Shim-pack CLC-NH2 Mobile phase : Acetonitrile / water = 7 / 3 Flow rate : 1.0 mL/min Temperature : Ambient Peaks 1. 甘油 2. 木糖 3. 果糖 4. 葡萄糖 5. 蔗糖 6. 甘露糖 7. 乳糖 反相色谱分析时 添加10-30 mM 三乙胺(triethylamine) 可以抑制碱性化合物色谱峰拖尾 添加1% 醋酸acetic acid 可以抑制酸性化合物拖尾 三乙胺(triethylamine) 也用于正相色谱中,使硅胶部分去活性, 以获得化合物合适的保留时间 METHOD SELECTION HOW TO GET STARTED ... 1. 样品及目标化合物性质 2. 样品预处理步骤 3. 检测器选择及其设置 4. LC方法选择 5. 分析条件优化 METHOD SELECTION HOW TO GET STARTED ... 1. 样品及目标化合物性质 样品基质的组成 样品中需要测定的化合物数目 目标化合物的理化性质 -- 与 LC 方法及溶剂选择相关 目标化合物的浓度范围 -- 与检测方法相关 样品/目标化合物的溶解性 -- 与预处理步骤相关 METHOD SELECTION HOW TO GET STARTED ... 2. 样品预处理步骤 样品状态 : 固体, 液体或溶液 -- 需要适当的溶剂或稀释剂. 基质中干扰杂质的存在 -- 液-液或液-固萃取. -- 沉淀/离心/超滤