环境因素对微生物的影响与紫外诱变实验93分.pdfVIP

环境因素对微生物的影响和紫外诱变反应 陈佳/2014030060 、生45 同组同学：王传鹏 实验日期：2016/5/5，提交报告日期:2016/5/7 教师:陈金春,麻彩萍 1 实验目的 1) 了解物理因素、化学因素及生物因素抑制或杀死微生物的作用及其试验方法。 2) 了解紫外线诱变原理，并初步掌握紫外线诱变育种的方法。 3) 继续练习单菌落划线分离微生物 2 实验原理 在自然界中，微生物分布极其广泛，几乎无处不在，微生物的生长发育受着环境因素的影响。而不同 的微生物及微生物不同的生理状态受环境因素影响的程度也不同，有的环境因素是微生物生长繁殖所必需 的条件，有的表现为抑制作用，有的表现为杀菌作用。 温度对微生物的影响 温度通过影响蛋白质，核酸等生物大分子的结构与功能，以及细胞结构和细胞膜流动性及完整性来影 响微生物的生长，繁殖和新陈代谢。微生物群体生长、繁殖最快的温度为其最适生长温度，但它并不等于 积累某一代谢产物的最适温度。粘质赛氏杆菌能产生红色或紫红色色素，菌落表面颜色随着色素的增加呈 现出由橙黄到深红色逐渐加深的变化趋势。 化学因素对微生物的影响 重金属及其盐类，有机溶剂，卤族元素及其化合物和表面活性剂等可杀灭细菌而作为常用的化学消毒 剂。根据是杀死还是抑制微生物，可分为致死剂和抑制剂。常用的 3 个指标：最低抑制浓度（MIC ）、半 致死剂量和最低致死剂量。 生物因素对微生物的影响 许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊代谢产物如抗生素，具有选择性地抑制或杀死其他微 生物的作用。不同抗生素的抗菌谱不同，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用。产黄青霉分泌青霉素抑制 细菌细胞壁的合成。青霉素主要抗 G＋细菌。链霉素作用于核糖核酸 30S 亚基，所以链霉素只作用原核生 物。链霉素以抗G－细菌为主。 紫外线对对微生物的影响 紫外线具有杀菌作用主要是因为它诱导形成胸腺嘧啶二聚体来破坏 DNA 的结构，使其不能正常行使 功能。另外，空气在紫外线照射下产生臭氧(O ) ，也有一定杀菌作用。紫外线杀菌力最强的波长是226-256nm 3 部分。紫外线透过物质能力很差，所以只适用于空气及物体表面的灭菌，它距离照射物以不超过 1.2 米为 宜。紫外线对于人体也有伤害作用。 紫外线诱变 紫外线对细菌生长的影响是随着紫外线对微生物照射剂量、时间及距离的不同，对微生 物的生理活动也相应地产生不同的效果：剂量高、时间长、距离短就易杀死它们，剂量低、 时间短、距离长时就会有少量个体残存下来，其中一些个体的遗传特性发生了变异。我们可 以利用这种特性来进行灭菌或菌种选育工作。紫外诱变最有效的波长仅仅是在253～265nm ， 一般紫外线杀菌灯所发射的紫外线大约有80%是254nm 3 实验操作 3.1 实验仪器、材料和用具 培养基：30 个淀粉培养基平板 菌源：在一边已长成一直线状菌落的产黄青霉、链霉菌平板各 1 个，培养 18 小时的金黄色葡萄球菌、大 肠杆菌、枯草杆菌菌液、粘质赛氏杆菌的平板 用具：无菌的小圆滤纸片、接种环、黑纸、标签纸、酒精灯、记号笔、试管架 试剂：0.1%甲紫， 5%苯酚，1%稀释的84 消毒液，1%甲醛，75%乙醇，95%乙醇，1%过氧化氢 仪器：紫外照射箱，37℃培养箱，25℃培养箱，30℃培养箱，32℃培养箱，34℃培养箱 3.2 实验操作步骤 温度对微生物的影响 用接种环取培养好的粘质赛氏杆菌单菌落和未知菌菌液，在牛肉粉蛋白胨平板上分区划线接种，要保 证能得到单一菌落。 注意线与线之间距离要合适，第一个区可以来回涂抹，保证菌较均匀分布在第一个区域内，从第二个区开 始，要先把接种环烧一下，以除去残留的菌体，冷却后再往一个方向划线，一般划4-5 个区域比较合适。 划线要干脆利落，靠接种环自身重量稍用力划，不要划破平板。 做好标记，将接种有粘质赛氏杆菌第一个平板在25℃，第二个在30℃进行培养，第三个在37℃进行 培养。24h 后取出，观察不同温度下培养粘质赛氏杆菌生长状况和产生色素情况。未知菌平板分别放在30℃， 32 ℃，34 ℃, 37 ℃培养，观察并比较单菌落大小。 化学因素对微生物的影响 用无菌吸头吸取100 μl 的金黄色葡萄球菌菌液于肉汤蛋白胨培养基上，用无菌涂布棒涂布均匀。 将上