Q_HDS086-2019护肠宝企业标准.pdf

Q/SXS 运城海达生物科技有限公司企业标准 Q/HDS086-2019 护肠宝 2019-10-16发布 2019-10-16实施 运城海达生物科技有限公司 发 布 前 言 本标准按照GB/T1.1《标准化工作导则第一部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 本标准为首次发布。 本标准由运城市海达生物科技有限公司提出。 本标准起草单位：运城市海达生物科技有限公司。 本标准主要起草人：卫海明 1、范围 本标准规定了丁酸梭菌的形态学鉴定、生化鉴定以及PCR、荧光PCR检测鉴定方法。 本标准适用于丁酸梭菌检测鉴定。 2、规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本使用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6435 饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 GB/T13079饲料中总砷的测定 GB/T13080饲料中铅的测定 原子吸收光谱法 GB/T13081饲料中汞的测定 GB/T13082 饲料中镉的测定 3 技术要求 下列术语和定义适用于本文件。 3.1外观: 灰白色至灰褐色粉末，无异臭味，无异物。 3.2 质量指标符合表 1 要求: 表1 丁酸梭菌粉剂控制项目指标 项目 指标 有效活菌数 丁酸梭菌，CFU/g ≥ 5.0X 109 水分 ≤ 10.0 砷(以总砷计)， mg/kg ≤ 3 铅(以Pb 计)，mg/kg ≤ 5 汞(以Hg计),mg/kg ≤ 0.1 镉(以Cd计)，mg/kg ≤ 0.5 杂菌比例，% ≤ 5 注:在产品标明的失效期前有效活菌数应符合指标要求，出厂时产品有效活菌数必须高出本指标 30%以上。 4 检验方法 4.1 感官检查 目测、鼻嗅进行。 4.2 丁酸梭菌及杂菌比例的检测。 4.2.1 试剂和溶液 a) 无菌水、蒸馏水: b) 生孢梭菌培养基(附录A) ; 4.2.2 仪器 4.2.2.1 灭菌锅: 4.2.2.2 微波炉或电炉 4.2.2.3 水浴锅: 4.2.2.4 组织培养盘: 24孔: 4.2.2.5 平皿: 4.2.2.6 密封玻璃试管: 4.2.2.7 恒温培养箱: 4.2.2.8 显微镜: 1000×: 4.2.2.9 恒温恒湿烘干箱。 4.2.3 测定步骤 4.2.3.1 用无菌操作称取试样25g，加入225mL无菌水中混匀成1:100 稀释的菌悬液，这样依次稀释， 分别得到1:10；1:5×10 ; 1:10；1:5×10；1:5×10；1:10 等浓度(每个稀释度必须更换无菌吸5 5 6 6 7 8 管)。 4.2.3.2 用ImL无菌吸管分别吸取不同稀释度菌悬液0.1mL，加至直径为9cm平皿的琼脂培养基表面， 用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀的涂于琼脂表面。每个样品取10个，培养12-50个小时，如菌落未长成， 再继续培养，直到有明显的菌落长成为止。每个稀释度取5-10个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观 察识别后记数菌落