人类基因组dna提取.pptxVIP

人类基因组DNA提取、限制性核酸内切酶切割的原理、方法、琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用;;提取方法: 1·从全血中提取 2·从口腔上皮脱落细胞，发根细胞中提取;(全血）原理：;（全血）操作方法： 细胞裂解与RNase/蛋白酶K 消化 　　1. 取100 μl抗凝全血置于1.5ml Eppendorf离心管中，再加入100 μl裂解液和20 μl RNaseA/蛋白酶K液，用移液器来回吹打混匀，室于55℃温浴35分钟，其间来回颠倒离心管几次，直至溶液呈水溶状。 　　2. 加入10μl 3M的NaAc(pH 4.8)，随后加入1250 μl结合缓冲液，充分振荡混匀，12，000 rpm离心30秒。;; DNA的纯化: 4. 再加入600 μl洗涤缓冲液（washing buffer）到离心吸附柱（套好收集管）中，12，000 rpm 离心30秒。 　　5．重复步骤4一次，12，000 rpm 离心3分钟以充分除去洗涤缓冲液。 　6．小心取出离心吸附柱，弃收集管，将离心吸附柱套入一个干净的1.5ml Eppendorf 离心管，并加入50 μl洗脱缓冲液(elution buffer) 到离心吸附柱中(洗脱缓冲液一定要加在离心吸附柱的正中)，放置1分钟，于12，000 rpm 离心30秒。 　　7．取出Eppendorf 离心管，其中便是所提取基因组NA。;（口腔上皮脱落细胞