平面色谱技术03.pptxVIP

5.平板色谱一般分离过程 将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。 纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。比移值（R?)：溶质移动距离与流动相移动距离之比纸~6%H2O 固定相~22%H2O流动相SSSSSSS1）纸色谱载体：滤纸（纤维素），可吸附~22%水，其中~6%与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子 　　　　　 之间的偶极作用）形成固定相纸色谱属于分配色谱 ------ 正相和反相分配纸色谱2)薄层色谱 薄层　分离机制 主要应用范围　氧化铝板 吸附 脂肪和芳香化合物、生物 硅胶板 吸附 碱、甾类、萜类改性硅胶 C2,C8,C18RP正相、反相 非极性物质、极性物质CN板 正相、反相 农药、酚类、甾类NH2板 正相、反相、 核苷酸、农药、酚类、甾类、 阴离子交换 维生素类、嘌呤衍生物纤维素 分配 氨基酸、梭酸乙酰纤维素 正相、反相 蒽醌类、抗氧化剂离子交换剂 阴、阳离子交换 氨基酸、梭酸、氨基糖、肽聚酰胺 分配 黄酮类、酚类葡聚糖凝胶 凝胶过滤 蛋白质、核苷酸2.薄层色谱操作技术1)薄层板(1)载体： 硅胶：表面带有硅醇基，pH = 4.5，经150℃活化脱水 后，4~6个硅醇基/nm2(2)薄层参数： ①厚度： 普通薄层 高效薄层 制备薄层 0.25mm 0.2mm 0.5~2mm ② 活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示,它随含水量的增加而减弱活度级别含水量Ｗ％吸附力硅胶氧化铝Ⅰ－－增强Ⅱ１０３Ⅲ１２６Ⅳ１５１０Ⅴ２０１５硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况(3)粘合剂与添加剂 ①粘合剂　a.煅石膏（CaSO4·2H2O)：120~140℃烘烤2~4h,过200目筛，密闭备用。　b.羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ-Ｎa)：0.2~1.0% ②添加剂　a.荧光指示剂ZnSO4:Mn 254nm ZnS·CdS:Ag 366nm　b. 酸、碱或缓冲液　c.硝酸银溶液　Ｒ?：饱合化合物 ? 炔烃 ? 反式烯烃 ? 顺式烯烃(4)薄层的制备方法 ①手工制板 a.软板 b.硬板(含粘合剂)匀浆涂布凉干活化②预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板 a.普通薄层预制板------硅胶、氧化铝、纤维素、硅藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相板 b.高效薄层预制板------氨基、氰基键合硅胶板、手性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝-纤维素、纤维素-硅胶、硅藻土-硅胶等）(5)薄层板的活化 吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质R?值就小。 ① 活化：105~120℃干燥0.5~1h Ⅱ~ Ⅲ 级 ②活度的标定： a.氧化铝薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取偶氮苯30mg和对-甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对-氨基偶氮苯各20mg溶于四氯化碳50ml中，摇匀备用。 标定方法：取上述溶液20μl点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的R? ，由下表中确定薄板的花度级别。 氧化铝薄层的活度级别染料活度级别（ R?值）ⅠⅡⅢⅣ偶氮苯0.590.740.850.95对-甲氧基偶氮苯0.160.490.690.89苏丹黄0.010.250.570.78苏丹红0.000.100.330.56对-氨基偶氮苯0.000.030.080.19b.薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取对-二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（苏丹Ⅲ ）各20mg溶于1ml氯仿中，摇匀备用。 标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己