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1. Illumina测序仪原理:
Illumina新一代测序技术可以高通量、并行对核酸片段进行深度测序,测序的技术原理是采用可逆性末端边合成边测序反应,首先在DNA片段两端加上序列已知的通用接头构建文库,文库加载到测序芯片Flowcell上,文库两端的已知序列与Flowcell基底上的Oligo序列互补,每条文库片段都经过桥式PCR扩增形成一个簇,测序时采用边合成边测序反应,即在碱基延伸过程中,每个循环反应只能延伸一个正确互补的碱基,根据四种不同的荧光信号确认碱基种类,保证最终的核酸序列质量,经过多个循环后,完整读取核酸序列。
利用该技术,可以对任何物种(包括动物、植物、细菌、病毒、寄生虫等)在DNA水平上进行全基因组测序、基因组靶向区域测序,检测基因组范围内的遗传变异或多态性,在细菌、病毒等病原溯源上分辨率最高;在RNA水平上进行基因的表达测序分析,准确检测基因表达量和表达片段的序列信息;对DNA处理后,可以对基因组甲基化水平进行检测,从表观遗传学角度对影响基因表达的因素进行分析;利用转录因子的抗体对DNA进行处理,寻找转录因子影响的DNA序列信息,定位影响基因表达的片段;自然界存在的微生物基本上都是混合物,传统的Sanger法测序技术无法对混合物中的各微生物进行准确检测,利用新一代测序的高通量、并行性特点,通过宏基因组分析方法,可以从整体上对自然界本来状态进行分析,得到最客观信息。
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