基因工程基本操作程序2.pptxVIP

济宁一中生物教研室 2010 .3 .3;;;2、目的基因的获得方法：;①从基因文库中获取目的基因：;②利用PCR技术扩增目的基因;③通过DNA合成仪直接人工合成;二、基因表达载体的构建;2、目的： ;启动子;;; 将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法（感染双子叶植物和裸子植物，对大多单子叶植物没有感染力） 基因枪法（常用于单子叶植物） 花粉管通道法（转基因抗虫棉） 将目的基因导入动物细胞 显微注射技术（“超级小鼠”） ; 将目的基因导入微生物细胞 导入大肠杆菌的方法：钙离子处理法 首先用Ca2+ 处理细胞,以增大细菌细胞壁的通透性,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态,这种细胞称为感受态细胞. 第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合,在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子,完成转化过程. 第三步目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制，由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。 ;四、目的基因的检测与鉴定;2、层次：;检测是否插入了目的基因 原理：分子杂交技术 过程：