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植物组织中维生素C含量测定 维生素C(又称抗坏血酸，Vc)是植物材料中普遍存在的一类酸性、还原性物质，也是维持人类健康所必需的维生素类物质之一。维生素C含量的多少与果蔬的品质、营养价值、抗病及抗衰老能力直接相关。所以，研究中经常需要测定维生素C的含量。 维生素C可分为还原型和脱氢型两种。根据其具有还原性的性质，有多种方法可以测定维生素C含量。此处介绍三种方法：2，6—二氯靛酚滴定法、荧光比色法和钼蓝比色法。前者用于测定还原型维生素C，后两种用于测定总维生素C含量。 三、钼蓝比色法 【原理】 钼酸铵在SO42-和PO43-存在下与维生素C反应，生成蓝色络合物(钼蓝)，在760 nm处有最大吸收。当维生素C浓度在2～40／μg·mL-1范围内，符合朗伯-比尔定律。新鲜植物样品中的还原糖及常见的还原物质不干扰测定，而且反应迅速，专一性好。 【仪器设备】 1．分光光度计。 2．匀浆器或玻璃研钵。 3．25 mL具塞刻度试管。4．100 mL容量瓶。 5．刻度吸液管。 6．离心管。 7．离心机。 【试剂】 1．5％钼酸铵溶液：称取5 g钼酸铵溶于蒸馏水中，并定容至100 mL。 2．草酸—EDTA溶液：称取6．30 g草酸和0．75 g EDTA—Na2溶于蒸馏水中并定容至l 000 mL。 3．5％(体积分数)H2SO4。 4．偏磷酸一乙酸溶液：取棒状偏磷酸3 g加20％冰醋酸48 mL，溶解后加蒸馏水稀释至100 mL(必要时过滤)，在冰箱中可保存3 d。 5．维生素C标准溶液：精确称取分析纯维生素C 100 mg，置100 mL容量瓶中，加适量草酸—EDTA溶液溶解后，再用该溶液定容到100 mL刻度，即成1 mg·mL-l之标准液，此溶液随配随用(如果维生素C纯度不够，应进行标定)。 【材料】 各种新鲜植物组织或器官。 【方法步骤】 1．制作标准曲线：取7支25 mL具塞刻度试管，按下表加入各种试剂： 试剂 试管号 1 2 3 4 5 6 维生素C标准液／mL 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 草酸—EDTA／mL 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 4.0 偏磷酸一乙酸／mL 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 1：19 H2SO4／mL 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 5％钼酸铵／mL 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 维生素C含量／mg 0 20 40 60 80 100 加完试剂摇匀后，置30℃水浴中保温15 min，用蒸馏水稀释到25 mL刻度，将溶液混匀，用1号空白管调零，在760 nm波长下比色，记录吸光度，以标准维生素C含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 2．样品提取与测定：称取小麦叶片或其他植物组织2～5 g(根据维生素C含量而定)，加5 mL草酸EDTA溶液研磨成匀浆，并仔细转入25 mL容量瓶中，再用提取介质冲洗研钵及研锤2～3次，冲洗液合并于25 mL容量瓶中。取一部分匀浆液经3 000 r/min离心10 min后，取1 mL上清液与标准管同法测定。若样品显色液中出现沉淀时，可过滤后进行比色，不影响测定结果。 3．结果计算 植物组织中维生素C含量(mg·100 g-1FW)= 式中，C：标准曲线上查得样品中维生素含量(mg)；Vt：样品提取液总体积(mL)；Vs：测定时用样品提取液体积(mL)；FW：植物组织鲜重(g)。 【附注】 温度对显色有影响，颜色强度随时间的延长而加深，因此显色温度和加入显色剂后的时间要求一致。 【参考文献】 1．宋治军，纪重光．现代分析仪器与测定方法．西安：西北大学出版社，1995 2．黄伟坤等．食品检验与分析．北京：中国轻工业出版社，1993 3．西北农业大学植物生理生化教研组．植物生理学实验指导．西安：陕西科学技术出版社，1986 4．西北农业大学．基础生物化学实验指导．西安：陕西科学技术出版社，1986