太湖水体中藻蓝蛋白紫外可见吸收光谱特征分析.pptVIP

太湖水体中藻蓝蛋白的紫外-可见 吸收光谱特征分析;; 紫外- 可见分光光度法（UV-vis）是目前世界上历史最悠、使用最多、覆盖面最广的分析方法之一。它已在生命科学、材料科学、环境科学、农业科学、计量科学、食品科学、医疗卫生、化学化工等各个领域的科研、生产、教学等工作中得到了非常广泛的应用。它可作定性定量分析、纯度分析、结构分析；特别在定量分析和纯度检查方面，在许多领域更是必备的分析方法。;; 由于藻蓝蛋白为胞内蛋白，提纯工艺复杂，当前环境监测研究中藻蓝蛋白的提取多以反复冻融、超声破碎、化学溶胀等细胞破碎方法为主，藻蓝蛋白浓度的计算主要沿用Bennett、abelson等学者基于单一藻种纯化光谱建立的经验公式。然而，反复冻融等提取结果的纯化程度不高，获取的藻蓝蛋白吸收光谱常常受到其他物质组分的影响而与经过硫酸铵盐析、柱色谱层析分离的纯化光谱存在差异。吸收光谱是藻蓝蛋白结构分析、浓度定量计算的基础，对内陆湖泊水色遥感反演研究也具有重要意义。;样品采集; ;;;藻蓝蛋白标准品的吸收光谱特征; ;;;;;;第一类是无峰型，即500~700nm间变化平缓，620nm附近未检测到藻蓝蛋白的吸收特征。推测其原因是该光谱形态的水样多采集于春、秋季（表1），水样中浮游藻类生物量小、蓝藻所占比例低，致使待测溶液的藻蓝蛋白含量微少难以检出。根据300~450nm的吸收差异，无峰型又可划分为无峰Ⅰ和无峰Ⅱ两个亚类。无峰Ⅰ仅260nm附近出现吸收峰，250~800nm的谱型更接近于水样的CDOM吸收谱（图4）。无峰Ⅱ在260和330nm处均具吸收峰，说明待测溶液中其他可溶性蛋白的含量较高。;第二类为单峰型，620nm附近出现藻蓝蛋白的特征吸收峰，光谱形态与标准品、铜绿微囊藻、鱼腥藻接近。但是由于藻种差异和提取纯度的影响，吸收峰的位置和峰值比与标准品、单一藻种不同。单峰型光谱的主吸收峰出现在260nm附近，次吸收峰位于330nm左右，260，330，620nm的平均峰值比约为11:4:1。单峰型光谱300~450nm的吸收谱型与铜绿微囊藻接近：300~350nm 出现吸收峰，300~450nm的吸光度值递减。 ;第三类为双峰型，即在620nm 藻蓝蛋白特征吸收峰的右侧???670nm处出现了另一个吸收峰，同时在300~450nm出现吸收肩。按照吸光度的高低顺序，双峰型光谱的主吸收峰出现在260nm附近，次吸收峰位于330nm左右，三个吸收峰260，330，620nm的平均峰值比约为10:5:1。从图1来看，双峰型光谱670nm附近的吸收谱带与藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白的吸收具有重叠。;太湖藻蓝蛋白的主吸收峰出现在260nm附近，紫外波段至蓝波段的吸光度值呈现衰减（图3），与标准品（图1）和Bennett、abelson研究中的纯化光谱不同。究其原因是受待测溶液中其他含苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸的可溶性蛋白影响。蓝藻细胞由众多可溶性蛋白构成，藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白等藻胆蛋白约占蓝藻可溶性蛋白的40％~60％。研究中使用的反复冻融法是水环境监测中常用的藻蓝蛋白提取方法，能有效地破碎藻体细胞，使藻胆体内的藻蓝蛋白溶出。但其分离、纯化能力有限，不足以将藻蓝蛋白与其他可溶性蛋白分离完全。; 根据水样的 CDOM 吸收数据(图4)，太湖藻蓝蛋白紫外波段至蓝波段的吸收还可能受到CDOM 的影响.CDOM 是由富里酸、腐殖酸、芳烃聚合物等一系列物质组成的水溶性物质，由藻类、细菌、水生植物等有机体的降解产生，在紫外和蓝光区具有强吸收。本研究采用滤膜过滤方式分离藻体，而CDOM 存在于过滤除去的水样中。但是，反复冻融法属于机械破碎，在藻蓝蛋白提取的同时会形成大量有机碎屑。这些有机碎屑在多次的反复冻融提取中会慢慢腐烂分解，释放出CDOM 。图3(a)中,太湖无峰Ⅰ型光谱在300~450nm未观测到蛋白中二硫键的吸收峰，250~800nm 的 吸 收 谱 型 与 标 准 品 不 同 而 接 近 于CDOM ,进一步说明反复冻融法提取的藻蓝蛋白溶液中存在CDOM组分；并且对于无峰Ⅰ而言，CDOM 的吸收可能掩盖了二硫键300~450nm的吸收信息。; 由图2和图3可知，太湖水体藻蓝蛋白吸收光谱的次吸收峰位于330nm左右，单一藻种则出现在620nm附近。产生该差异的原因可能有以下两种：一是太湖水体中藻体多以群体态形式聚集并形成包裹体，包裹体表面附有由果胶酸、粘多糖等构成的群体胶鞘。群体胶鞘类似于藻体细胞外壳，其存在会增加藻蓝蛋白提取的难度，使得太湖藻蓝蛋白待测溶液的提取纯度低于单一藻种。第二种可能是受到其他非蓝藻门藻种的影响。太湖是多藻种共存的湖泊水体，水体中除了蓝藻外，还会存在诸如斜生栅藻、梅尼小环藻等的其他