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常用菌悬液的制备、保存及使用方法 ?摘要: 常用菌悬液的制备、保存及使用方法 一、常用试验用菌种的生物学特征（1）枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501]形态与染色：菌体细短棒状，单个或成链状，两端半圆... 常用菌悬液的制备、保存及使用方法 一、常用试验用菌种的生物学特征 （1）枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63 501] 形态与染色：菌体细短棒状，单个或成链状，两端半圆形，染色均匀，芽孢椭圆形或圆柱形，位于菌体中央，革兰氏染色阳性，能运动。 培养特性：营养琼脂平板：菌落表面粗糙，圆形，灰黄色，边缘锯齿状，分离时应挑选粗糙形菌落。普通肉汤培养基：呈少量浑浊并产生沉淀，在液体表面形成皱状厚膜粘附于试管壁上。最适宜培养温度30~37℃，生长温度范围：15~35℃，兼性厌氧或需氧。 抵抗力：菌体湿热55℃ 1小时被杀死，芽孢100℃ 3小时或120℃ 40分钟被杀死。 （2）铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10 104] 形态与染色：革兰氏阴性杆菌。菌体细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。 培养特性：本菌为专性需氧菌，生长温度范围25~42℃，最适生长温度为25~30℃，特别是该菌在4℃不生长而在42℃可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性的色素，如绿脓素（pyocynin）与带荧光的水溶性荧光素（pyoverdin）等。在血平板上会有透明溶血环。 （3）白色念珠菌[CMCC(F) 98 001] 形态与染色：本菌细胞呈圆形或卵圆形，很象酵母菌，直径3～6μm，比葡萄球菌大5～6倍，革兰阳性，但着色不均匀。 培养特性：本菌在血琼脂或沙保氏琼脂上，37℃或室温孵育2～3日后，生成灰白乳酪样菌落，涂片镜检，可看到表层为卵圆形芽生细胞，底层有较多假菌丝。 （4）金黄葡萄球菌[CMCC(B) 26 003] 形态与染色：圆球形排列成典型的葡萄串状，营养琼脂平板培养多呈短链状或双球状，无鞭毛，不能动，不产生芽孢，革兰氏染色阳性。 培养特性：在28~38℃生长较好，pH生长范围为4.5~9.8，pH7.4左右生长最好。平板分离时应挑选光滑菌落。 （5）大肠埃希菌[CMCC(B) 44 102] 形态与染色：短形杆菌，两端钝圆，无芽孢，革兰氏染色为阴性。 培养特性：需氧菌，也兼性厌氧。 二、检定菌的基本要求 （1）显示临床特点，对抗生素主要组分敏感，对杂质，降压物质及毒性物质无作用或作用很低。 （2）灵敏、稳定，抑菌圈边缘清晰，测定误差小。 （3）易于培养、保存，又无致病性。 （4）与其它国家药典的试验用菌最好一致，便于单位统一。 （5）常用菌悬液制备时所用溶剂、保存方法及使用期限 名称 所用溶剂 保存方法 使用期限 枯草芽孢杆菌 灭菌水或0.9%灭菌生理盐水 4~8℃冰箱保存 1个月 铜绿假单胞菌 灭菌水或0.9%灭菌生理盐水 4~8℃冰箱保存 半个月 金黄葡萄球菌 灭菌水或0.9%灭菌生理盐水 4~8℃冰箱保存 3-7天 大肠埃希菌 灭菌水或0.9%灭菌生理盐水 4~8℃冰箱保存 7天 白色念珠菌 灭菌水或0.9%灭菌生理盐水 4~8℃冰箱保存 半个月 三、菌悬液浓度的简单确定法：麦氏比浊法 麦氏比浊管是McFarland发明的一种用于微生物比浊的不同浊度的标准浊度管。具体的配制方法是根据硫酸和氯化钡的比例来定的，有表可查，这样不同比例生成的硫酸钡沉淀的浓度不同，且都有定值。 麦氏比浊管的配比如下： 管 号 (McFarland) 0.5 1 2 3 4 5 0.25%BaCl2?(ml) 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 1%H2SO4?(ml) 9.8 9.6 9.2 8.8 8.4 8.0 菌液浓度 (×108/ml) 1 3 6 9 12 15 操作方法： （1）轻摇标准试管。 （2）无菌操作将被测定的肉汤培养物加到与标准管相同直径（大小）的无菌试管中。 （3）以无菌操作向被测定试管加入无菌生理盐水，直到浓度与所要求的标准管的浓度相同。 使用技巧： （1）直接用眼睛看（需要经验，误差较大）。 （2）找张白纸，打上平行直线，然后看（如图示，利用光在不同浓度液体折射不同）。 ? 注意事项： （1）测定好的细菌，最好做一下梯度稀释涂布计数。 （2）此浓度是对应的大肠杆菌的浓度，如果是其他细菌，会有一定的差别。 （3）此种方法测定的准确性不是很高，如果是对细菌数量要求较精确的，请用紫外分光光度计。