《DB1308∕T 007-1999 马铃薯茎尖脱毒技术规程》.pdf

B23 承德市地方标准 D.B1308/T007-1agQ 马铃芬茎尖脱毒技术规程 1999-07-1C发布 199-07-15实施 承德市技术监督局发布 细笼3扭耘翻时布飞翩冷 前 言 本标准由围场满族蒙古族自治县技术监督局提出。 本标准由围场满族蒙古族自治县农业局负责起草。 本标准附录A为本标准附录。 本标准主要起草人： 丁明亚、谭宗久 隋友、陈福祥 本标准自1999年7月，15日实施。 承德市地方标准 马铃 规程 戊专支3WT007.1990 1 + r 本标准规定了马铃薯茎尖脱毒种薯生产中茎尖剥离、脱毒苗挤养、繁 殖等技术要求。 本标准适用于马铃警栽培种及其各种野生资祥的脱毒。 2培钾筑刹作 2．1母液配制 *MS M方，将大爹元素加大1。倍．徽耸元索、有机成份、 生长调节Ai铁盆加大20倍，用容梦瓶精确配例定容，分*1编号为俘液1 1. 母液2,母液V毋液4,母液5放入冰箱。4℃保存备用。 2．2培养荃液配制 根据涪养基配方分别取母液按营加入定容，每升加入20g蔗糖,搅拌 均匀，PH值调为6．8，每升培养垂旅中加入79琼脂，加热。 2．玲养荃分装 将制备好的培养基液趁热分装在洗刷干净、高温(200220t )灭菌 后的三角瓶中．每瓶20m 1.试管口以消毒棉塞或封口膜封紧。 2.41压灭菌 将分装好挤养羞的三角瓶装于灭菌锅中。以i．丨kg/ cm2的从．力进行高压 灭苗20分钾，降压后取出平放于无菌室。形成固体培养参备用： 承德市权术监督局飞的9-07-10批准 1997-07-15实施 AD BI公仅3/T04?铂1999 3徽尖组织倒离 3．飞茎尖组织剥离取材， 在田间选带有该品种典型特征植株结的块茎．经热处理进行钝化催芽。 芽长到长3-scm时剪下做组织i1!离材料。 3.2无菌室灭菌：无菌室应用前应用70 %酒精镶试地板及44净工作台。齐 用5-7/的来苏水对天花板墙壁喷雾。紫外线灯照射24小时（初次用 照射48小时》。 3．3剥离材料消毒 将芽剥去外面几层叶片．放于烧杯中，用沙布封口．放于自来水下冲 洗30分钟。然后在无菌室内，用95%酒精漫泡一下，放入5%漂白粉或 次叙映钠溶液中浸泡石分钟，再用无菌水冲洗3-5次。 3．4茎尖组织剥离 在无菌室中，超净工作台土，将消毒好的材料在40倍双筒解剖镜下 进行剥离，剥去幼叶。切取带卜2个叶原垂的茎尖组织，0.2。二左右移置 到放有培养垂的三角瓶或试管中的培养垂上。每瓶只放一个茎尖组织。 3．6培养 将放有茎尖组织的器皿放千日温2。～2苏℃。夜温不低于，几℃¡¤ 光照2000-3000勒克斯条件下的组培室宁培界。茎尖组织变绿（成活）后转 移培养成组涪苗。苗长A 0个叶片左右切段扩繁株系。 4切阴门翩明猫陈系待检 4. 1无曹室灭菌：同3．2 皿1308/功07-1999 4 ‘2组堆苗株系扩繁．将组培苗编号。按号进行株系扩繁。扩繁在无菌室 超净工作台上进行．每株苗切成4，5段，每象＿一水茎节带一片叶一木腋芽， 里三角瓶培葬葵上培养。’经2O 6娜暇Ull 石‘1按株杀取样，取；-2个整株进行病毒检A I采用DAS--ID,ISA法检a ,#Pvx. 户r i对滚V。采用往返电泳技术检侧只打v， 石‘2皿复检侧2-3次。 去，3根据检侧结果，样品中仍带有PVXI%pvy1W l%月滚v和珍脚* .0的为不合格． 效将其对应编号的组培苗淘汰，或作变通处再处理《见附录A）。而脚x、 1L r y1 巧