SDS聚丙烯酸胺凝胶电泳.docVIP

SDS聚丙烯酸胺凝胶电泳 一．原理 SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）是对蛋白质进行量化、比较及特性鉴定的一种经济快速而且可重复的方法。该法主要依据蛋白质的分子量对其进行分离。蛋白质在一定浓度的SDS中与SDS分子按比例结合，SDS能破坏蛋白质分子间的非共价键，使蛋白质变性并失去原有的空间构型，形成带负电荷的SDS一蛋白质复合物。这种复合物由于结合了大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态，形成仅保持原有分子大小为特征的负离子，从而降低和消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异。这样各种SDS一蛋白质复合物在电泳中不同的泳动仅反应了分子量的不同，且蛋白质分子量的对数同其相对迁移率呈直线关系。根据此原理可以制成各种参考蛋白质分子量的对数和它的相对迁移率的标准曲线，从而求得被测蛋白质的分子量。 二．材料及试剂 1．Pharmasla电泳仪 EPS500／400 2．垂直板状电泳装置（Bio－RAD MiniPROTEAN 11 CELL） 3．本室常用蛋白质MARKER。 低分子量97,400kd 66,200kd 43,000kd 31,000kd 20,100kd 14,400kd 中分子量66,000kd 45,000kd 36,000kd 29,000k