细胞的破碎与分离包涵体.pptxVIP

细胞的破碎与分离;;概述;细菌细胞壁结构;;back;酵母细胞壁结构;一、细胞壁的组成和结构;细胞破碎机理图;细胞破碎;细胞破碎;细胞破碎;细胞破碎;;细胞破碎;;细胞破碎;;;细胞破碎;化学破碎方法;化学破碎方法;物理破碎方法;细胞破碎后，大量带电荷的内含物被释放到水相，使导电率上升。 ;破碎率的测定;基因工程包涵体的纯化;包涵体的分离和蛋白质复性;;外源蛋白在大肠杆菌中的积累;包涵体表达形式的优点;包涵体表达形式的缺点;包涵体的纯化方法;包涵体获得几种常见的工艺路线(一);包涵体获得几种常见的工艺路线（二）;1）包涵体的洗涤 细胞破碎后，包含体呈颗粒状，致密。 洗涤的重要性：收集的沉淀中，除包涵体外，还包括许多杂质，如膜蛋白、肽聚糖、脂多糖等，复性时会与目标蛋白一起复性形成杂交分子而聚集，给后步纯化带来困难。 洗涤剂：温和的表面活性剂、蔗糖、低浓度的弱变性剂（如尿素）或脱氧胆酸等。能溶解除去部分膜蛋白和脂质类杂质。 洗涤剂浓度以溶解杂质，不溶解包涵体中表达产物为原则。;包涵体的溶解;包涵体的复性;复性注意事项