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早上好！晚上好电子显微镜术赵翔 细胞生物电子显微镜术（electron microscopy）是指利用电子与样品作用时所发出的信息，对样品进行微区观察和分析的一种方法学。最常见的电子显微镜： 透射电镜（Transmission electron microscope, TEM） 扫描电镜（Scanning electron microscope, SEM）透射电镜图象扫描电镜图象图片一、基本概念 分辨率：分辨两点间最小距离的能力 肉眼的分辨率：0.2 mm光镜的分辨率：0.2μm电镜的分辨率：0.2 nm（1 mm＝ 103μm, 1μm ＝103 nm）光镜的分辨率局限在0.2μ，是因为光的衍射。光具有波动性和粒子性。衍射是因光的波动性而出现的一种物理现象。衍射：光波在传播时，如果通过一个大小近于或小于波长的孔，则以孔为中心，形成环形波向前传播。 光的衍射0.612ld=nsina最小分辨距离α为孔径角(光线入射角的一半)，sinα1，n为物镜与物之间介质的折射率，λ为入射光的波长。可见光的波长是400nm－800nm。?为了减小d，我们用油镜， n = 1.5, sinα=0.87（最大的孔径角接近90o），此时?α0.612ld=nsina最小分辨距离α为孔径角(光线入射角的一半)，sinα1，n为物镜与物之间介质的折射率，λ为入射光的波长。?为了减小d，我们用油镜， n = 1.5, sinα=0.87（最大的孔径角接近90o），此时可见光的波长是400nm－800nm。肉眼的分辨率：0.2 mm光镜的分辨率：0.2μm电镜的分辨率：0.2 nm（1 mm＝ 103μm, 1μm ＝103 nm）二、电子显微镜的产生基础 1．根据法国de Broglie的理论，运动电子具有波动性，我们可以将其同光一样，作显微镜的光源，结合经典量子理论，我们可计算出运动粒子的波长：λ＝粒子的波长； h＝Planck常数； m＝粒子的质量； v＝粒子的速度。 (nm)考虑到高速电子运动时的质量变化(用相对论进行修正)，可得到公式： 将λ代人d的计算公式，若所用电压为60kv，则d≈0.24nm。 修正 公式肉眼的分辨率：0.2 mm光镜的分辨率：0.2μm电镜的分辨率：0.2 nm（1 mm＝ 103μm, 1μm ＝103 nm）根据这两个原理制成了电磁透镜。2．德国科学家 Busch 证明：轴对称电磁场可以象凸透镜汇聚光波成象那样聚焦运动的电子束并使其成象。 电磁透镜三、电磁透镜的结构电磁透镜是电镜的核心，它可以象光学透镜那样工作。螺旋缠绕的通电短线圈可以产生轴对称磁场，但这样的磁场延伸的很广，是一个沿轴的柱形，且中心强度最大。 电磁透镜1除内壁外，将线圈周围用软铁包裹，就可产生较强的并较局限的磁场。电磁透镜2如果线圈内部也裹上软铁，只在内部留一个小园孔，得到一个非常集中而且轴很短的磁场。用这种线圈作的透镜焦距长。 电磁透镜3要提高放大倍数，缩短透镜焦距，就需减小线圈直径，这就会最终导致线圈过热。这一问题可用在小园孔上下各加一圆锥形，有轴孔的软铁片来解决。这两个软铁片叫极靴，做工很精细，两极靴顶端的距离和园孔的直径均为几毫米。线圈加电流后，极靴间形成一强的范围很窄的轴对称磁场。这种磁场起着电子透镜的作用。电磁透镜4电子在极靴孔中先受向外或向内的力，后受轴向的力，所以电子的运动是绕轴旋转的，同时向轴折射汇聚成象。因此通过电磁透镜的电子总是汇聚的，而且像不仅能颠倒，还能旋转（电流的方向大小可以改变像的角度）。电子在极靴中的运动电子枪照明系统聚光镜 样品室 电子光学系统物镜中间镜成象系统 投影镜 机械泵真空系统油泵供电系统四、透射电镜的结构(一)、电子光学系统照明系统包括 电子枪 聚光镜 物镜成象系统包括中间镜投影镜电子枪 由三部分组成：阴极（灯丝，f）、栅极(控制极,s)和阳极(a)。(一)、电子光学系统照明系统包括 电子枪 聚光镜 物镜成象系统包括中间镜投影镜聚光镜的作用是将从电子枪发出的电子聚焦到样品上，以得到好的照明效果。 磁透镜 物镜是第一级放大电磁透镜，位于样品室下。它的好坏的电镜的分辨率起决定性作用，是评价电镜好坏的重要指标。 中间镜的结构与物镜类似。用来放大的电磁透镜。调节其电流可使像连续放大。它的调节范围很大，一般在一千倍到几十万倍。物镜和中间镜（二）、真空系统电子显微镜中，电子从电子枪发出通过样品到达荧光屏的整个路程应该不与空气分子碰撞，这就要求镜筒中具有高真空。镜筒的高真空还可以使灯丝寿命延长，避免电子枪放电而引起高压不稳，也可使样品避免污染。 衡量真空度的单位是Torr (乇，音“托”)， 即毫米汞柱