酵母RNA提取修改.pptVIP

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2020-03-15 发布于福建
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酵母RNA提取修改.ppt

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酵母ＲＮＡ的制备、鉴定及含量测定;结构简介;二、实验原理;提取 ;提取方法;实验室法：苯酚法、去污剂法和盐酸胍法、稀盐溶液提取法 0.14mol/L 其中苯酚法又是实验室最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后，RNA即溶于上层被苯酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在苯酚层中，向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出。此法能较好地除去DNA和蛋白质，提取的RNA具有生物活性。工业法：稀碱法或浓盐法;RNA的鉴定;三、实验材料、主要仪器和试剂;;四、操作方法;3．沉淀RNA 将离心得到的上清液倾于50mL???杯中，并置于放有冰块的250mL烧杯中冷却，待冷至10℃以下时，用6mol/L HCl小心地调节pH至2.0～2.5。随着pH下降，溶液中白色沉淀逐渐增加，到等电点时沉淀量最多（注意严格控制pH）。调好后继续于冰水中静置10min，使沉淀充分，颗粒变大。 4．抽滤和洗涤;上述悬浮液以3 000r/min离心10min，得到RNA沉淀。将沉淀物放在10mL小烧杯内，用95％的乙醇5～10mL充分搅拌洗涤，然后在铺有已称重滤纸的布氏漏斗上用真空泵抽气过滤，再用95％乙醇5～10mL淋洗3次。由于RNA不溶于乙醇，洗涤不仅可脱水，使沉淀物疏松，便于过滤、干燥，而且可除去可溶性的脂类及色素等杂质，提高了制品的纯度。 5．干燥从布氏漏斗上取下有沉淀物的滤纸，放在8cm表面皿上，置于80℃烘箱内干燥。将干燥后的RNA制品称重。 ;（二）RNA的鉴定 ;谢谢！