UU核酸检测试剂盒产品使用说明书(修改).docVIP

上海国兴生物科技有限公司 解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法）说明书 【产品名称】 通用名称：解脲脲原体（UU）核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) 英文名称：Detection Kit for Nucleic Acid of Ureaplasma urealyticum (PCR-fluorescence probing) 【包装规格】 32人份/盒 【预期用途】 本试剂盒用于定性检测尿道、生殖道分泌物拭子样本中的解脲脲原体核酸成分，主要用于解脲脲原体感染的临床辅助诊断。 根据相关文献研究，解脲支原体有14 株脲原体标准血清型可分为微小脲原体（Ureaplasma parvum，UP）1、3、6、14 和解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum，UU）2、4、5、7、8、9、10、11、12、13，其中UP为条件致病菌，致病性与其含量有关，且普通人也有携带少量UP。UU是引起非淋球菌性尿道炎、阴道炎等病症的主要致病菌之一，也是引起输卵管炎、盆腔炎、慢性前列腺炎、流产、产后热等的重要病原菌之一。目前，临床上常用的脲原体检测方法有液体培养和核酸检测，但其并不能鉴别出其病菌是UP还是UU。 【检验原理】 本试剂盒选用针对解脲脲原体（UU）特异性基因片段设计特异引物及特异Taqman荧光探针，该探针能与引物扩增区域中间的一段DNA摸板发生特异性结合，在PCR延伸反应过程中，Taq酶的外切酶活性将5′端荧光基团从探针上切割下来，使之游离于反应体系中，从而脱离了3′端荧光淬灭基团的屏蔽，即能接受光刺激而发出可供仪器检测的荧光，从而实现在全封闭反应体系中对解脲脲原体（UU）核酸的自动检测，发出荧光信号的强度与UU-DNA的量呈正相关。 【主要组成成份】 序号 组分名称 装量 每个反应 体系用量 主要成份 1 核酸提取液 1.8ml 50μl 含NaCl、NaOH、EDTA、NP-40 2 PCR反应液 500ul 15μl 含Taq酶、UDG酶、10×buffer、dNTP 3 UU引物探针 120ul 2.5μl UU特异性引物和探针 5 MgCl2 350ul 10.5μl MgCl2、水 6 阳性对照 300ul - UU培养物 7 阴性对照 300ul - 纯水 8 UU标准品1 10ul - 质粒(106拷贝/μl) 9 UU标准品2 10ul - 质粒(105拷贝/μl) 10 UU标准品3 10ul - 质粒(104拷贝/μl) 11 UU标准品4 10ul - 质粒(103拷贝/μl) 注：不同批号试剂盒中各组份不能互换。 【储存条件及有效期】 试剂应储存在-20℃保存，产品有效期为12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性，但试剂反复冻融不得超过3次。 生产日期、有效期至：见标签字样。 【适用仪器】 具有FAM、JOE荧光检测通道的ABI 7300/7500、ABI 7500 Fast、LightCycler 480等实时荧光定量PCR仪。 【样本要求】 使用藻酸钙拭子、普通棉拭子或涤纶拭子采集尿道、生殖道部位带柱状上皮细胞的分泌物样本，应当选用国家批准生产的一次性使用的男性拭子或女性拭子，拭子应当包括套管、棉签杆、塞子，棉签杆与塞子都应连接牢固。 尿道：对男性患者，先用生理盐水清洗尿道口，将男用取材拭子插入尿道内1-2cm，稍用力转动，保留数秒钟再取出，以采集到粘膜上皮细胞。对女性患者，可低着耻骨联合轻轻按摩尿道后，用同男性相似的方法取材。 宫颈：取材前用温水或生理盐水湿润扩阴器，应避免使用防腐剂和润滑剂。如果宫颈口外面的分泌物较多，先用无菌棉拭清除过多的分泌液，将女用取材拭子插入宫颈管内2-3cm，稍用力转动，保留数秒，采集阴道分泌物。 阴道：对于子宫切除的妇女和青春期前女孩可采用阴道样本。将取材拭子置于阴道后穹窿10-15s，采集阴道分泌物。如果处女膜完整，则从阴道口取材。 【检验方法】 1.样本处理（在样本处理区进行）： （1）标本中加入1ml无菌生理盐水，充分震荡摇匀，吸取200μl液体转至1.5ml离心管中，12000rpm离心5分钟，弃上清取沉淀加入50μl核酸提取液，震荡混匀，100℃水浴或金属浴10min，12000rpm离心5min，吸取上清进行PCR扩增用（如样本裂解产物当天不使用，请于-20℃保存。） （2）阴性对照、阳性对照直接取出100μl，12000rpm离心5分钟，弃上清取沉淀，加入50μl核酸提取液，震荡混匀后，100℃水浴或金属浴10min，12000rpm离心5min，备用。 注：若样本沉淀过少，吸取上清时需注意留少许底部液体。 2. 扩增试剂配制（试剂准备区） 从试剂盒中取出 PCR反应液、引物等，在室温下融化，振