PCR、引物设计与逆转录PCR.pptVIP

PCR（Polymerase Chain Reaction)技术即聚合酶链式反应，又称DNA体外扩增技术。 1985年由美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明，荣获1993年度诺贝尔化学奖。;DNA半保留复制的机理； 体外DNA分子于不同温度下可变性和复性的性质。;PCR扩增体系;1.变性：高温使双链DNA解离形成单链（95℃，30s）。 2.退火：低温下，引物与模板DNA互补区结合（45～ 65℃，30s） 。 3.延伸：中温延伸。DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（ 72℃，30 ～ 60s ）。;;;;;;;;理论：2n递增（n为循环次数），如果扩增30循环，目标DNA可增加230也就是109倍。 实际：由于引物和底物的消耗，酶活力的下降等因素，扩增产物的增加，逐渐由指数形式变为线性形式，所以实际上进行30个循环后，扩增倍数一般可达106 ～ 107。 ;PCR扩增曲线;PCR扩增条件;PCR反应条件 94℃ 5min 94℃ 30s 56.2℃ 30s 72℃ 30s 72℃ 7min 4℃ ∞ ;1.避免PCR试剂的污染 2.最适合的反应条件 3.设置对照组： ①PCR空白对照：在反应体系中剔除反应模板。 ②PCR阴性对照：即反应体系中用无关的基因片段代替目的模板。 ③PCR阳性对照：即反应体系中以已知能够成功进