杀菌剂实验（结果补充版）.docxVIP

实验二 杀菌剂生物测定 ——生长速率测定法 一、实验目的 学习用生长速率测定法测定杀菌剂对病原菌的菌丝生长的抑制作用。 二、实验原理 将不同浓度的药液与融化的培养基混合，制成带毒培养基平板，在平板上接种病原菌，以病菌菌丝扩展速度的快慢来判定药剂毒力大小。可用两种方法表示：一定时间内菌落直径的大小；菌落达到一定直径所需时间。 三、实验材料 1．供试菌种：立枯丝核菌敏感菌株，抗1和抗2为通过双苯菌胺驯化得的抗性突变体 2．供试药剂：嘧菌酯、噻呋酰胺、苯醚甲环唑、咯菌腈、甲醇。 3．实验器材：无菌操作台、灭菌培养皿、PDA培养基（葡萄糖18g、琼脂粉15g、马铃薯200g、去离子水补足1L）、移液枪（最大量程分别为1ml和200ul）、灭菌枪头、酒精灯、打孔器、接种针。 四、实验方法及步骤 1．药液配制：用甲醇配制母液，浓度为105 μg/mL。再用甲醇稀释成系列浓度药液（每个浓度各配500uL)备用。 组号 菌株 药剂名称 药剂浓度 1 敏感 嘧菌酯 5、1、0.5、0.1、0.01、0.001 1-1 1-2 2 抗性1 25、10、1、0.1、0.01、0.001 1-1 1-3 3 抗性2 25、10、1、0.1、0.01、0.001 1-2 1-3 4 敏感 噻呋酰胺 1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.0011-4 1-5 5 抗性1 25、10、1、0.1、0.01、0.001 1-4 2-1 6 抗性2 25、10、1、0.1、0.01、0.001 1-5 2-1 7 敏感 苯醚甲环唑 1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.001 2-2 2-3 8 抗性1 25、10、1、0.1、0.01、0.001 2-2 2-4 9 抗性2 25、10、1、0.1、0.01、0.001 2-3 2-4 10 抗性1 咯菌腈 1、0.5、0.1、0.05、0.01、0.001 抗性2 25、10、1、0.1、0.01、0.001 2-5 2-5 黄色底表示周三班级所做，1-1表示一班第一组 绿色底表示周四班级所做 2-4表示二班第二组 2．带毒培养基制作：制作PDA培养基。于150mL三角瓶中分别加入45mL培养基。用移液枪吸取45 μL药液（低浓度到高浓度顺序）或甲醇（对照）加入到培养基中，充分摇匀后，倒入灭菌的培养皿中，三次重复。 3．病原菌接种及培养：用直径为0.5cm打孔器在立枯丝核菌落边缘同一圆周上打取菌饼，菌丝面朝下接种于培养基中央，置于23℃恒温培养箱内黑暗培养。72小时后，当对照组菌落边缘快达到而未接触培养皿侧壁时，检查记录。 五、结果检查记录 菌落直径的测量：测量立枯丝核菌落直径（以mm表示），每个菌落十字交叉测两个直径，以其平均数代表菌落大小。 计算药对菌丝的生长抑制率： 生长抑制率= (对照菌落直径-菌饼直径)-(处理菌落直径-菌饼直径) ×100% 对照菌落直径-菌饼直径 计算有效抑制中浓度（EC50）：将生长抑制率数据转换成机率值（Y）、药剂浓度（μg/mL）转换成以10为底的对数值（X），在Microsoft Excel中作回归直线，求出毒力回归方程（Y = A + BX）和相关系数（r），计算出药剂对番茄灰霉菌菌丝生长抑制的有效中浓度（EC50）。 六、习题：试根据表1所列数据分析立枯丝核菌抗双苯菌胺突变体对供试4种杀菌剂敏感性是否发生了变化，以及其产生变化的可能原因是什么？ 表1 4种杀菌剂对立枯丝核菌毒力测定结果 药剂 菌株 组别 回归方程式 相关系数 EC50 嘧菌酯 敏感 163-1 y=0.5802x+5.4334 0.93 0.179 嘧菌酯 敏感 163-2 y=0.4346x+4.714 0.9952 4.549 嘧菌酯 抗性1 161-1 y=0.2236x+4.1924 0.61 100 嘧菌酯 抗性1 163-3 - - 100 嘧菌酯 抗性2 161-2 y=0.4059x+5.1934 0.8755 100 嘧菌酯 抗性2 161-3 y=0.205x+4.3129 0.8146 100 噻呋酰胺 敏感 163-4 y=1.0694x+6.4225 0.9317 0.047 噻呋酰胺 敏感 163-5 y=1.7767x+7.6068 0.9984 0.034 噻呋酰胺 抗性1 161-4 y=0.1219x+4.3471 0.9242 0.063 噻呋酰胺 抗性1 164-1 y=0.7978x+6.0228 0.7294 0.052 噻呋酰胺 抗性2 161-5 y=0.773x+5.9257 0.9606 0.023 噻呋酰胺 抗性2 162-1 y=0.955x+6.1499 0.88 0.06 苯醚甲环唑 敏感 164-2 y=