干细胞及成体细胞.ppt

干细胞技术及其应用前景;干细胞的研究史;细胞核转移技术;第一节 概 述;干细胞（stem cell）是一类具有自我??新能力和多向分化潜能的未分化或低分化原始细胞群体，也称为“万能细胞”。 通常呈圆形或椭圆形，细胞体积小，核相对较大，细胞核多为常染色质，并具有较高的端粒酶活性，不同干细胞有各异的蛋白质标志分子，可作为确定干细胞位置、分离提纯干细胞的标志。 ;二、干细胞的增殖特征;干细胞的分裂方式;（一）按其分化潜能的大小，干细胞可分为三类：一是全能干细胞，二是多能干细胞，三是单能干细胞。 ;（3）单能干细胞（multipotent stem cell ） 也叫专能、偏能干细胞，指除了自我复制外，只能分化为一种类型子代类型的一类细胞。如肌肉中的成肌细胞等。;全能干细胞;胚胎（5-7天）;（二）根据干细胞的来源，可分为胚胎干细胞、成体干细胞、其他诱导多能干细胞。 （1）来源于胚胎—— 胚胎干细胞ESC（Embryonic Stem Cell ） 指来源于哺乳类动物胚胎发育早起囊胚期内细胞团细胞，在体外培养条件下，具有体外无限复制和分化为体内任何种类细胞的潜能。如：ES细胞、EG细胞、EC细胞等。 ;（2）来源于成体—— 成体组织来源的干细胞 ASC（Adult Stem Cell ） 是指那些分布在成体组织中尚未分化的、具有自我更新、并负有构建和补充某种组织的各种类型细胞潜能的干细胞，又称为组织特异性干细胞（Tissue-specific stem cell）。 它们主要用于维持细胞功能的稳定，具有修复和再生能力，能够产生新的干细胞，或者能按一定的程序分化，形成新的功能细胞，使组织和器官保持生长和衰退的动态平衡。如：神经干细胞，表皮干细胞。;（3）诱导性多能干细胞（ induced pluripotent stem cell ，iPSC） 来源于终末分化的体细胞，通过重编程，逆向转变为多能的干细胞。;15;第二节 成体干细胞的分离培养;一、成体干细胞的来源;成体干细胞的优点： （1）获取相对容易； （2）源于患者自身的成体干细胞在应用时不存在组织性相容的问题，避免了移植排斥反应和使用免疫抑制剂； （3）胚胎干细胞分化具有“非定位性”，目前，尚不能控制胚胎干细胞在特定部位分化成相应的细胞，容易导致畸胎瘤。理论上，成体干细胞致瘤风险低，所受伦理学争议较少； （4）成体干细胞也具有类胚胎干细胞的多向分化潜能。;造血干细胞（Hematopoietic Stem Cells，HSC）指具有自我更新能力和多向分化潜能的最原始的造血细胞。 造血干细胞的来源：骨髓、外周血、脐带血、胎儿造血系统。 ;不同来源造血干细胞的比较： 　;造血干细胞的表面标志;根据造血干细胞的表面标志，可通过免疫细胞化学、流式细胞仪、分子杂交和PCR等多种细胞生物学和分子生物学手段来检测造血干细胞。现大多仍然基于对CD34+细胞的富集来筛选造血干细胞。 方法：密度梯度离心、拒染和抗原标志物进行密度梯度离心、流式细胞分选、免疫磁珠分离、平面黏附分离等 ;（1）流式细胞分选;（2）免疫磁珠分离;免疫磁珠法分为阳性分离法和阴性分离法： 阳性分离法－磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞 阴性分离法－磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞 一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。;造血干细胞的检测方法;二、间充质干细胞;分化潜能;16;全骨髓标本 ;（二）密度梯度离心法 利用不同颗粒之间存在沉降系数差时，在一定离心力作用下，颗粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同区域上形成区带的方法。 ;MSC的应用;第三节 干细胞的应用研究;一、移植研究—恢复器官功能 ;2．基因治疗。即通过胚胎干细胞和基因工程技术，矫正缺陷基因。 因干细胞能自我复制更新，是基因治疗的理想靶细胞。将治疗基因整合到干细胞，再将干细胞移植入人体中，能够持久地发挥作用，而不担心像分化的细胞那样，在细胞更新中可能丢失治疗基因的结果。 ;二、基础研究 ;三、癌症治疗