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2020-04-15 发布于江西
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SDS-PAGE问题及解决方法.doc

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一：电泳跑的太慢A.?内槽缓冲液要没过凹玻璃板，低于平玻璃板。内槽和外槽缓冲液不能相通。B.电泳缓冲液pH值及浓度是否配制正确。C.分离胶缓冲液和浓缩胶缓冲液pH值及浓度是否配制正确。D. 电压太低，选择合适的电压。E. 样品盐浓度太大，除去样品中的盐。?二：微笑现象.?电泳温度太高或者太低，1．选择合适电压；2．加入缓冲液太少，将缓冲液加满；3．如确实需要高电压，可将电泳仪至于4℃冰箱中。三：蛋白条带歪曲或波浪形A:凝胶原因：1．胶时，胶中有气泡。2．放入梳子时，梳子下面有气泡；3．分离胶表面不平，一定要用水覆盖；B: 样品原因：1．盐浓度高，透析除盐；2．样品有沉淀，上样前离心。四：条带不清楚A. 凝胶原因：1．试剂一定要用高纯度；2．胶配置后不能放置时间太长；3．样品PH不对；4．缓冲液PH不对；5．降低电压或电流。B. 样品问题：1．样品离子浓度比凝胶中的离子浓度低；使用和凝胶缓冲液一样的样品缓冲液。2．样品浓度太高或低，减少或增加浓度；3．上样前加热样品，加热后马上放入冰水中；4．样品保存在低温中，防蛋白降解。五：样品跑完浓缩胶，进入分离胶前没有压缩成一条直线1.?浓缩胶和分离胶pH值不正确；2.浓缩胶太短；3.试剂一定要用高纯度；4.样品中钠离子或钾离子浓度高。六：样品分不开1．凝胶浓度太大，凝胶浓度太小；调整浓度大小；2．蛋白亚基没有完全分开，样品缓冲液SDS浓度不够，充分加热。七：制胶时漏胶玻璃板没有装好。重新安装玻璃板，锁紧螺丝要拧紧，密封条老化。八：样品孔之间的凝胶凝固不好凝固温度低，时间太长。凝胶最好在25℃到