实验十五酸性磷酸酶的显示.pptVIP

实验十一：细胞内化学成分的显示 方法 —— 酸性磷酸酶的显示 ? 【课前预习】 ? 1 ．溶酶体分为几类，各有何特点？ ? 2 ．溶酶体是如何形成的？其标志酶是什么？如何在显微 镜下显示？ ? 3 ．溶酶体具有哪些功能？ ? 【目的要求】 ? 1 ．熟悉酸性磷酸酶显示方法的原理及操作步骤 ? 2 ．观察酸性磷酸酶在细胞中的分布 ? 【基本原理】 ? 1 ．细胞化学：细胞化学是在保持细胞原有形态结构的基础上， 利用已知的化学反应原位显示细胞内的某种化学成分，然后通过 显微镜进行定性、定位、定量研究的科学。 ? 2 ．细胞化学技术要求：保持样品的形态结构不发生改变；保存 细胞内生前化学成分及酶的活性；显示成分的化学反应必须对将 被显示的化学物质有高度特异性和高度灵敏性；反应所生成的产 物要在原位沉淀、显色明显、不溶、不扩散，并在重复实验中结 果一致。 ? 3 ．染色的作用：由于正常的生物组织是无色透明的，因此无法 在光镜下进行观察。因此必须要对样品进行染色；染色剂可以渗 透到组织的间隙中，细胞中的蛋白质等成份可以吸附不同的色素 粒子；染色剂中的阳离子和阴离子可分别与细胞中的酸性、碱性 物质相结合。染色就是根据这些原理，利用染色剂与细胞内含物 的物理作用与化学作用，将细胞和组织染成各种不同的颜色；由 于染色剂的化学性质不同，以及固定材料时所用的固定剂不同， 染色剂对被染色的组织有一定的选