质粒提取和纯化及质粒转染所需试剂及操作规范.docVIP

二、 质粒的提取和纯化所需 1. 液体LB培养基 （1）配方 蛋白胨（TRYPONE） 1%(g/ml) NaCl 1% 酵母粉（YEAST EXTRACT） 0.5% 加蒸馏水定容 （2）将配好的培养基高压后，恢复室温后置于4度保存备用，使用时恢复室温 （3）配液体LB培养基时，一般不加抗生素（高温会使抗生素失活，也不宜4度保存），因此若要在此培养基中加抗生素，应该在使用时根据比例添加 2. 固体LB培养基 （1）配方 蛋白胨（TRYPONE） 1%(g/ml) NaCl 1% 酵母粉（YEAST EXTRACT） 0.5% 加蒸馏水定容时（装到可以高压的瓶中），由于加入的琼脂粉有一定的体积，因此定容时，注意略微少加点水，根据要加入的琼脂粉而定（琼脂粉只有在高压后溶解） （2）直接向以上配好的LB中加入加琼脂粉1.5%，以配成固体培养基 （3）高压：高压完注意保温，温度过低培养基会凝固，因此从高压锅里取出后应立即铺板 （4）铺板 此操作在细胞室安全柜中无菌操作，铺板前应提前开紫外灯照台子15min，点燃酒精灯。 若铺的是无抗生素的阴性平板，则在铺板时直接铺板；若铺的是含有抗生素的平板，则在铺板时，应等到高压后的培养基温度降到不烫手时（高温会使抗生素失效），根据比例加入抗生素后在铺板。 培养基铺到平板上，每个平板约25ml，注意保温，一定要在培养基凝固成固体