重叠延伸PCR技术.pptVIP

重叠延伸PCR技术 （SOE PCR） 1. 重叠延伸PCR技术的概念 重叠延伸PCR技术(SOE PCR)是指在PCR技术的基础上，采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成了重叠链,通过重叠链的延伸,将不同来源的片段重叠拼接起来的一项新技术。该技术可以很快获得依靠其它限制性内切酶消化的方法难以得到的产物，其成功的关键是重叠互补引物的设计。SOE PCR在基因的定点突变、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有着独特的应用。 2. 重叠延伸PCR技术的原理 重叠延伸PCR 技术由于使用了具有互补末端的引物，使PCR 产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。可简单迅速的将两个DNA 片段连在一起，用于嵌合基因的构建。 比如有两个基因，一个命名为M，一个命名为N，基因M和N序列如下所示： M的序列为5’-ATGCATGCTAGCTAGAACGCTACGCTGACTACCCCCTGATC-3’ N的序列为5’-ATGCTAGTAGCTAGCCCCCCCCAGGGGATAATTTTTTAAAACG-3’ 现在要将它们连接到一起，首先必须要设计引物，假设引物的序列为： M1:5’-ATGCATGCTAGCTAGAACGCT-3’ M2:5’-GGGGGGCTAGCTACTAGCATG