（2020年整理）5[1].水产微生物学与免疫学(免疫学基础).ppt

1．免疫应答的概念、特点与类型。 2．免疫应答的一般过程与效应。 ? 3．变态反应的概念、类型与特点。 4．免疫耐受的概念及特性。 第五节复习思考题 一、免疫学诊断 二、免疫预防 三、免疫治疗 第六节 免疫学应用 ?一、免疫学诊断 ?(一)免疫诊断试剂 免疫学诊断是应用已知诊断试剂(抗体或抗原)，对患病动物进行抗原或抗体的测定，从而诊断疾病。 诊断抗原：是利用细菌或病毒经过培养后，将菌体(病毒)灭活(或将菌体裂解)后制成。 诊断血清：是用抗原免疫动物而制成的，一般采用给动物多次注射抗原，然后采集免疫动物血液，分离血清，加入一定防腐剂而制成。 免疫血清经过提纯后得到IgG，再用酶、荧光染料、放射性同位素标记，制成标记抗体。 ?(二)常用免疫血清学诊断技术 1、常用免疫血清学诊断技术的类型 （1）凝聚性反应：凝集试验和沉淀试验 （2）标记抗体技术：荧光抗体技术、酶标抗体技术等 （3）有补体参与的反应：如补体结合反应 （4）中和反应：如病毒中和试验、毒素中和试验 凝集试验 酶标抗体技术 A. 凝集反应 当颗粒性抗原与其相应抗血清混合时，在一定浓度的电解质环境中，抗原凝集成大小不等的凝集块，叫凝集反应。 凝集反应广泛地应用于疾病的诊断和各种抗原性质的分析。即可用已知免疫血清来检查未知抗原，亦可用已知抗原检测特异性抗体。 凝集试验的种类 （1）直接凝集试验： 颗粒性抗原 （2）间接凝集试验： 可溶性抗原 （3）病毒的血凝与血凝抑制试验 （4）乳胶凝集试验 可溶性抗原与相应抗体混合，在电解质存在下，两者比例适合，即可有沉淀物出现，叫沉淀反应(Precipitation)。 由于沉淀反应抗原多系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。 为了求得抗原与抗体的适宜比例，保证有足够的抗体，而且抗原分子小，具有较大的反应面积，因此操作上通常是稀释抗原，不稀释抗体。 沉淀反应的种类有环状沉淀试验、絮状沉淀试验、琼脂扩散试验及免疫电泳试验等。 B. 沉淀试验 C. 酶标抗体技术(Enzyme-labelled antibody technique) 是根据抗原抗体反应的特异性和酶催化反应的高敏感性而建立起来的免疫检测技术。 原理：酶标记抗体，既不影响抗体的免疫反应性，也不改变酶的催化活性；加入酶底物后，酶可使其（供氢体）由无色的还原型转化为有色的氧化型。这种有色反应的颜色变化与样本中抗原或抗体的量成正比，且能用分光光度计进行测定。 最常用的是： 辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶 D. 荧光抗体标记技术(Fluoresent-labelled antibody technique） 是应用荧光素对抗体或抗原进行标记，然后用荧光显微镜观察所标记的荧光以分析相应抗原或抗体的一种方法。 原理: 荧光素在超低浓度时可被短波光源激发，在荧光显微镜下可观察到荧光。 荧光素: 能产生明显荧光并作染料用的有机化学物质，称为荧光素，如异硫氰酸荧光素(FITC)、四乙基罗丹明(RB200)和四甲基异硫氰酸罗丹明(TMRITC)。 操作过程： （1）标本制备：涂片、压片；冰冻切片、石蜡切片等 （2）荧光抗体染色：有直接法和间接法 （3）荧光显微镜观察：光源为高压汞灯；要滴加缓冲甘油 2、免疫血清型学诊断技术的特点 (1) 特异性与交叉性 (2) 可逆性，分子表面结合 (3) 比例适当性 (4) 存在二阶段性， 即结合阶段和可见阶段 ?(三)免疫诊断技术的应用 1.用于传染病的诊断：利用抗原抗体反应的特异性和敏感性来诊断疾病。用已知抗原诊断液，检查患病动物血清中是否存在有相应的特异性抗体，借以诊断传染病。亦可用已知诊断血清或标记抗体，检查动物体内及排泄物中是否存在特异性抗原，用以检查病原体的存在。 2.用于病原的分型与鉴定：用已知抗血清或不同型的单因子血清，对分离的病原菌进行鉴定，以确诊该病原。用单因子血清分析细菌的抗原组分，确定细菌的类型，如用沙门氏菌的单因子血清分析待检沙门氏菌的菌体抗原及鞭毛抗原的种类，从而确定该菌属何种沙门氏菌。 二．免疫预防 1. 生物制品：利用微生物、寄生虫或其代谢产物制成的用于预防、诊断或治疗传 染