第3部分：血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染间接ELISA诊断技术-山东地方标准.docVIP

DB 37/T ××××—×××× PAGE 4 ICS FORMTEXT 65.020.30 FORMTEXT B41 FORMTEXT DB FORMTEXT 37 FORMTEXT 山东省地方标准 DB FORMTEXT 37/T FORMTEXT ××××— FORMTEXT 2020 FORMTEXT FORMTEXT Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术　第3部分：血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染间接ELISA诊断技术 FORMTEXT Diagnostic techniques for fowl adenovirus group Ⅰ infection　Part 3：An indirect ELISA for detection of antibody against fowl adenovirus group Ⅰ serotype 4 FORMTEXT 2020- FORMTEXT ××- FORMTEXT ××发布 FORMTEXT 2020- FORMTEXT ××- FORMTEXT ××实施 FORMTEXT 山东省市场监督管理局 发布 DB 37/T ××××—2020 PAGE 1 前??言 本标准按照GB/T 1.1－2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：山东农业大学。 本标准主要起草人：刁有祥、唐熠、杨晶、王鸿志、陈浩、冯强、张吉、宋存鑫、李伟。 Ⅰ群禽腺病毒感染诊断技术　第3部分：血清4型Ⅰ 范围 本标准规定了间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测鸡血清4型Ⅰ群禽腺病毒抗体的技术规范。 本标准所规定间接酶联免疫吸附试验（ELISA）适用于鸡血清4型Ⅰ群禽腺病毒感染抗体的特异性检验。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489　实验室生物安全通用要求 GB/T 27401　实验室质量控制规范动物检疫 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 血清4型Ⅰ群禽腺病毒　Fowl adenovirus group Ⅰ Serotype 4 是引起鸡心包积水-肝炎综合征的病原，主要造成3周龄～5周龄鸡突然死亡，并伴随有心包积水和肝炎。 一抗　Primary antibodies 第一抗体就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。本标准的一抗为经离心后分离后鸡的血清待检样品。 酶标二抗　HRP-labeled secondary antibodies 二抗是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白，同时用辣根过氧化物酶进行标记的抗体。本标准中的酶标二抗为兔抗鸡辣根过氧化物酶标记的IgG，其效价应在1:32以上。 血清标准品 SPF鸡接种血清4型Ⅰ群禽腺病毒经PCR检测为阳性后，制备的血清为阳性血清；SPF鸡的血清作为标准阴性血清，PCR检测结果为阴性。 实验室要求 环境 实验室符合GB 19489和GB/T 27401要求，实验室必须为生物安全Ⅱ级（BSL-2级）及以上实验室。 生物样品应严格控制对环境的污染，试验结束后应将相关样品（血液）收集高压灭菌后，送有资质的医用垃圾处理公司做最终处理。 人员 操作人员应接受实验室生物安全、实验室质量管理和血清学实验室检测技术培训。熟悉生物样品处理以及熟悉间接ELISA检测结果的判断方法。 仪器设备 台式高速离心机（最大转速为15000 rpm）。 酶标仪。 微量移液器：最大量程分别为10 μL、20 μL、100 μL、1000 μL。 聚苯乙烯板。 水平振荡器。 恒温培养箱。 试剂或材料 除另有规定外，所有生化试剂均为分析纯，水符合GB/T 6682规定的一级水。 阳性血清，SPF鸡接种血清4型I群禽腺病毒经PCR检测为阳性后，制备的血清。 阴性血清，SPF鸡血清，PCR检测结果应为阴性。 血清4型I群禽腺病毒抗原：经浓缩纯化灭活后的全病毒，浓度为4.68 mg/mL。 酶标二抗：兔抗鸡辣根过氧化物酶标记的IgG，效价应在1:32以上。 磷酸盐缓冲液（PBS），见附录A.1。 包被液，见附录A.2。 洗涤液，见附录A.3。 样品稀释液（封闭液），见附录A.4。 底物溶液，TMB底物显色液。 终止液（浓度为2M），见附录A.5。 样品 样品的准备与处理 待检禽血清样品，每份不少于200 μL，无溶血。 用样品稀释液4.4.8将被检血清样品稀释10倍（1:10，如10 μL血清加入90 μL稀释液中）。注意