实验一-光合细菌的培育.pptVIP

实验一 光合细菌的培养 一、实验目的： 通过本实验，了解并掌握光合细菌的培养方法。 二、实验仪器设备： 光和细菌的培养设备：包括灭菌设备、培养容器、培养用具和检测 仪器。 1.灭菌设备：高压蒸汽灭菌锅，用于高压湿热灭菌。 2、培养容器 (1)试管：φ15mm×L160mm(中型试管)。主要用于液体培养和斜面 培养。 φ20mm×L180mm(大型试管)。主要用于制平板深层试管 或盛无菌 水等。 (2)培养皿： φ6～10cm(常用φ9cm).用于制作平板培养基，以分离 菌种和观察菌落形态。 (3)移液管：容量1～10ml(常用1ml、5ml、10ml)，制备培养基、稀 释液体、吸取样品等使用。 (4)锥形瓶(有、无具塞磨口两种)：30～500ml。用于各种光和细菌单体或组合连续培养的逐级扩大培养用。 (5)三角烧瓶：500～5000ml，用于扩大培养。 (6)细口瓶：5000～20000ml，用于扩大培养和生产性大量培养。 (7)塑料薄膜袋：用于生产性大量培养。 (8)大型塑料水槽：一般为圆柱形。容量为300～500L，用于生产性大量培养。 3、培养用具 (1)操净工作台：用于菌种的分离和接种。 (2)恒温培养箱（或人工气候箱，光照培养箱）：主要用于培养菌种和小型培养使用。箱内必须带有钨丝灯泡的人工光源。 (3)电冰箱和冷藏冰柜：主要用于菌种和某些有机试剂的保存以及光和细菌母菌种液的长期保存(5-10)℃。 (4)接种环：用于菌种取样、接种。 (5)电动离心机：用于液体菌种浓缩和采收。 (6)空压机：用于微气方式培养。 (7)电风扇和排气风扇：用于培养时控温、调稳。 (8) 分析天平：用于试验产品烘干后的称重及分析称样等。 (9）此外，应还有分液漏斗、载波片、盖玻片、酒精灯及电光源(碘钨灯、白炽灯泡等)设施及其支架、控温设备和充气设备。 三、实验内容： 1.光和细菌培养基的制备 2.光合细菌菌种的分离 3.菌种的培养 4.菌种的保存 5.光和细菌的大量培养 6.光合细菌的培养技术和保种技术。 四、实验步骤与方法： 1.微量金属元素(T.m.) 贮液培方 EDTA 2.5g ZnSO4·7H2O 10.95g MgSO4·H2O 1.54g CuSO4·5H2O 0.39g CoCl2·6H2O 0.2g FeSO4·7H2O 7.0g 蒸馏水 1000ml 2.生长素贮液培方： 生物素 1mg 烟酸(尼克酸) 0.1mg 对氨基苯甲酸 10mg 维生素B1 100mg 蒸馏水 1000ml。 酵母膏和生长素贮液二者有一即可 (即：有了酵母膏就不必加生长素)。 （二）光合细菌菌种的分离 培养光和细菌，首先要有菌种，菌种可以从别的单位获得。如果别的单位没有适合的菌种，就要从自然生态环境中分离。分离菌种的工作要求虽然比较高，但也并非高不可攀，只要按照要求操作，就能分离出需要的菌种。 1.采样 要根据光和细菌的生态特点，选择光和细菌大量分布的地方采样。 目前，水产养殖业使用的光和细菌，主要是红螺菌科的一些种类。这些光和细菌是以有机质作为光和细菌的碳源和供氢体，故广泛分布在被有机质污染的地方，如河底、湖底、海底、水田、沟渠和污水池塘的泥土以及豆制品厂、淀粉厂和食品工业等废水排水沟处呈橙黄色或分红色的泥土中。 光和细菌在污水池塘等有机质含量丰富的地 方，分布数量更大。 在以上所述地方都可以采集样品。采样工具有 杯、采水器和采泥器，浅水处直接用杯舀取少 量样品，深水处借用采水器和采泥器采样，采 集到的底泥连同水一起放入广口瓶中带回。 2.富集培养 采集的样品中光和细菌的数量一般较少，并且含有不少杂菌，难以直接进行分离，必须进行富集培养。 所谓富集培养，就是为要分离的光和细菌提供适宜的培养基与培养条件，使其大量增殖。同时抑制杂菌的生长。 富集培养 除了培养基以外，还要给培养物制造缺氧的培养环境。为此，先将采回的样品(泥土或水)装入玻璃圆筒或大型试管或具塞的磨口玻璃瓶中，再倒入预先配制好的液体培养基，充分搅拌，使样品与培养基充分分散混