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二、植物基因工程载体的构建 美国孟山都(Monsanto) 英国PBI(植物育种研究所) 美国PGEL(植物基因工程实验室) 比利时Gent实验室 三、植物基因转移到植物细胞的方法 1.DNA直接导入法 PEG法 电击穿孔法 微弹射击法 直接注射法 2.载体法 Ti质粒介导基因转化(双子叶植物) 脂质体 病毒(花椰菜花叶病毒) 四、转基因植物细胞的组织培养 叶盘法(多种双子叶植物) DNA的直接转移法(单子叶植物) 五、基因转化后植物细胞的选择与转基因植物的鉴定 1.抗生素选择法 2.除草剂选择法 胭脂碱合成酶基因 报道基因(氯霉素乙酰基转移酶基因CAT、GUS基因、荧光素酶基因)检测 六、转基因植物的应用 1.抗除草剂基因工程 2.抗虫基因工程 3.抗病毒基因工程 4抗菌基因工程 5.抗逆基因工程 6.改变花色 7.植物医药基因工程 A.用植物生物反应器生产疫苗 B.用植物生物反应器生产抗体 8.次生代谢产物基因工程 转 基 因 技 术 转基因技术,一个可以改变我们生活的东西,正一天天向我们靠近,令我们产生无限的遐想。然而,它又是一把双刃剑,它所存在的隐患也是巨大的。让我们一起关注——转基因技术。 科学家为了改变某些动植物产品的品质或为提高其产量,把一种生物的基因转到另一种生物上去,叫作转基因。以转基因生物为原料加工生产的食品就是转基因食品。例如,在西红柿里插入某种细菌的基因,可以使西红柿花成熟的时候果体比较硬,便于储运、加工;给玉米插入抗虫害基因,可增强其抗虫害能力(例如,美国培植的一种认Bt的玉米,其内含有毒素,这种毒素能够杀死欧洲玉米螟)等等。因为这些东西都是人为的,对人体及食物链是否有害,目前尚无定论,须经长时间的实践检验才可得出正确结论。? 近几年来,全世界转基因作物种植发展迅速,1999年达到 4000万公顷,仅美国、加拿大、阿根廷三个国家就占其中的99%;此外,中国、埃及、南非、印度和巴西也有一定量的种植。主要品种有:抵抗昆虫的玉米、抵抗杀虫剂的大豆、抵抗病害的棉花、富含胡萝卜素的水稻、耐寒抗旱的小麦、抵抗病毒的瓜类和控制成熟速度及硬度的西红柿等。据国际农业生物工程应用技术采购管理处今年2月公布的数字表明,中国转基因作物种植面积发展很快,2006年比 1989年增加了800倍,达到600万公顷,主要是棉花等。? 关于转基因的种种忧虑? 人们对于转基因生物和转基因食品的忧虑主 要有两个方面,一是对人体健康是否有害, 一是对生态环境是否构成潜在威胁。 ? 联合国粮农组织指出,随着传统的栽培品种逐渐被少数转基因品种所取代,生物的多样性有可能会慢慢消失;另一方面,可能会引起异型杂交--植物之间交叉授粉,导致出现抗病能力特强、蔓生速度更快的杂草,从而扰乱生态系统的平衡。对于人体,基因的某种转移也许会产生新的毒素和过敏原,引起意想不到的中毒或过敏反应。例如,一些科学家发现,转基因食品可令肝脏发大;英国科学家普斯陶伊实验,连续喂食老鼠基因改良土豆,发现部分老鼠的肾、脾。大脑等器官收缩或发育不正常,免疫系统变弱,等等。? * * 利用培养的植物细胞生产次生物质 植物细胞不仅具有形态建成的全能性,还具有物质代谢的全能性,通过药用植物细胞或组织的大量培养,可以获得某些有用成分,特别是用化学手段合成困难的药物。目前通过组织培养成细胞培养的药用成分有生物碱,甙类、甾醇,萜稀类、醌类、木质素类、黄酮类、糖类、蛋白类、有机酸类、芳香油、酚类等上百种。培养物中药用成分产量超过1%干重的药用植物已有几十种之多。 3.1培养基的选择 对细胞培养来说不同的培养基往往使细胞产率和所需的次生产物的产率都不同。例如,用不同的培养基长春花细胞悬浮培养物,在细胞产率和蛇根碱的产率上场产生不同的结果,且适合于细胞生长的培养基不一定有利于次生物的生产。另外,降低培养基的成本也是研究的重要方面。 3.2细胞株的选择 植物的根、茎、叶、花、果实、种子、髓等组织或器官都可用来诱导愈伤组织,在实际工作中往往是在生长活跃的部位取材,进行愈伤组织的培养,此时可以进行各种培养基的选择,经过一段时间的培养,可以选择出适当的培养基作为以后培养的基本培养基。等愈伤组织长大后,转移到液体培养基中进行振荡,分离细胞。一般愈伤组织不会很好地分散成理想的单细胞悬浮液,大多为50—200个细胞组成的细胞团。 : 3.3 培养方式和培养容器 小规模培养可选择大小适当的三角瓶(50—2000ml),里面有选定的培养基,把筛选好的细胞株接入以后,转旋培养(60—150转/min),4周后可进行继代培养。若采用固体培养,在培养基中加入0.7-0.9%琼脂。大规模培养方式主要是液体悬浮培养法,培养容器用桨式搅拌罐、空气提升式反应器。
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