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八角茴香油的抗菌作用 [关键词] 八角茴香油；提取；抗菌；抗氧化 [key words] star anise oil; extraction; antibacterial; antioxidative 八角茴香（《本草纲目》）、大茴香等，主产于我国；干燥的成 熟果实入药，为常用中药，有祛风理气、和胃调中、温阳散寒、理 气止痛等功效。而且其味之浓郁，常用于食品和药物制剂的矫味和 防腐。八角果实含挥发油、有机酸类、黄酮类、茴香醚、茴香醛等 有效成分，具有抑菌作用。近年来，科学家对天然植物的抗菌防腐 作用进行了深入研究并发现了不少新颖“植物抗菌素”，并从植物 体内的次生物质中寻找能抑制有害生物的有效成分，用人工直接提 取应用或明确有效成分结构后，人工合成制作新型抗生素成为新药 开发热点之一。同时开发高效、无毒、安全的天然抗氧化剂，具有 广阔的前景。笔者对八角的有效成分——八角茴香油的提取、抗菌 及抗氧化性方面进行了初步的研究，结果如下： 1 仪器与试药 1.1 仪器 分析天平（上海 tg328a，上海精密科学仪器）；753 型紫外可见 分光光度计（上海第三仪器厂）；岛津uv-240z 紫外分析仪；sxt-2 索氏提取器（上海洪纪仪器设备有限公司）；微量移液器 （thermofish，芬兰雷勃）；八角 （广州市药材公司）；95%乙醇 （药 用）；dpph 自由基（sigma，批号：s90790-379）。 1.2 供试菌种 金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、黑曲霉菌、酵母菌均由广州工业 微生物检测中心提供。 2 方法与结果 2.1 正交试验优选提取工艺 2.1.1 供试验用八角原料的制备 将八角置于 60℃烘箱中烘干， 粉碎，过 60 目筛得，备用。 2.1.2 乙醇回流提取试验条件的筛选 采用正交试验设计，将影 响提取效率的主要因素：八角与 95%乙醇的用量比例、索氏提取的 虹吸次数、室温下八角在 95%乙醇中浸泡时间作为试验因子，进行 3 因素 3 水平的正交试验设计，每个试验方案重复 3 次，每次投放供 试用八角原料 20 g，收集所得八角茴香油，计算八角茴香油的提取 率，取 3 次试验值的平均值作为各试验方案的评价指标。因素水平 见表 1。 2.1.3 八角茴香油提取 称取置于 60℃烘箱中烘干，粉碎，过 60 目筛的八角原料20 g 放入烧瓶，加入适量 95%乙醇分别浸泡 1.2、 1.8、2.4 h，过滤，直接用过滤滤纸将过滤后的八角粉包成圆柱形， 放入索氏提取器内，用少量 95%乙醇洗涤烧瓶2~3 次，洗涤液和滤 液一起全部集合在烧瓶，加入 95%乙醇至预定量，加热回流提取， 回流至预定条件，停止加热，自然冷却，用倾泻法将烧瓶中的提取 液转移到烧杯中，用少量乙醇洗涤烧瓶 2~3 次，合并提取液回收乙 醇并浓缩。 2.1.4 鉴别 取 “2.1.3 项”下提取的八角茴香油 1ml，加无水乙 醇 2 ml ，溶解得供试品溶液。①精密吸取该供试溶液 2 μl 点于以 羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶ｇ薄层板上，挥干，再点加间苯三 酚盐酸试液约 2 μl，即显粉红色至紫红色的圆环。②另精密吸取 该供试溶液 10 μl 置 10ml 量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，照 分光光度法（《中国药典》2010 年版附录ⅴa）测定，在 259 nm 波长处有最大吸收。 2.1.5 八角茴香油提取率 八角茴香油提取率 （%）＝八角茴香油 重量/八角粉重量×100％。 2.1.6 试验与结果 根据表 1 选用 l9 （34）正交试验表研究提取 工艺参数，试验设计与结果见表 2，方差分析见表 3。 2.2 抑菌实验 2.2.1 抑菌试液的制备 以95%乙醇倍比稀释，取 “2.1.3 项”下 提取的八角茴香油配制成含生药 100% （即 1ml 含 1g）的抑菌试液 50 ml；另取倍比稀释用的 95%乙醇 50 ml 作抑菌对照试剂，备用。 2.2.2 菌悬液的制 配制牛肉膏蛋白胨培养基，转接金黄色葡萄 球菌、大肠埃希菌、黑曲霉菌和酵母菌至试管斜面，25℃培养 24 h 活化，用灭菌注射用水洗下菌苔制成菌苔菌悬液，制成菌悬液， 细菌使用平板计数法，霉菌、酵母菌使用显微镜直接记数法测菌体 个数， 调至浓度为含菌体为 1.5×108 cfu/l 的菌悬液，备用。 2.2.3 抑菌滤纸片的制备 选择吸水