生化制品技术实验指导.pdfVIP

《生化制品技术》实验大纲 一、实验目的 本实验是《生化制品技术》课程的配套实验，目的是增加学生对 生物药物及生物技术制药的感性认识及提高学生的实验操作能力。要 求学生熟悉并掌握生物药物的制备过程和生物技术制药的基本操作 方法。 二、适用专业及层次 适用于生物制药技术专业学生 三、实验内容和学时分配 序号 实验内容 学时 实验类型 必做/选做 备注 牛奶中酪蛋百和乳蛋白素粗 1 4 操作实验 必做 品的制备 2 卵磷脂的制备及鉴定 4 操作实验 必做 3 薄层板制备及使用 4 操作实验 必做 4 甘露醇的制备及鉴定 4 操作实验 必做 5 甲壳素制备 4 操作实验 必做 合计 20 实验一 牛奶中酪蛋白和乳蛋白素粗品的制备 一、实验目的 1.掌握盐析法的原理和操作。 2.掌握等电点沉淀法的原理和基本操作。 二、实验原理 乳蛋白素是一种广泛存在于乳品中，合成乳糖所需要的重要蛋白质。牛奶中 主要的蛋白质是酪蛋白（caseins），酪蛋白在 pH4.8 左右会沉淀析出，但乳蛋白 素在 pH3 左右才会沉淀。利用此一性质，可先将 pH 降至 4.8 ，或是在加热至 40 ℃的牛奶中加硫酸钠，将酪蛋白沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇，这个性质被利用 来从酪蛋白粗制剂中除去脂类杂质。将去除掉酪蛋白的滤液的 pH 调至 3 左右， 能使乳蛋白素沉淀析出，部分杂质即可随澄清液出去。在经过一次 pH 沉淀后， 即可得粗乳蛋白素。 三、实验器材 烧杯（250ml 和 100ml）、玻璃试管（10mm×100mm）、离心管（50ml）、磁 力搅拌器、pH 计、离心机、水浴锅。 四、试剂和材料 脱脂牛乳或低脂牛乳、无水硫酸钠、0.1mol/L HCL、0.1mol/L NaOH、滤纸、 pH 试纸、浓盐酸、乙酸缓冲溶液 0.2mol/L （pH4.6）、乙醇。 五、操作步骤 1.盐析或等电点沉淀制备酪蛋白 （1）将 50ml 牛乳倒入 250ml 烧杯中，于 40℃水浴中加热并搅拌。 （2）向上述烧杯中缓缓加入（约 10min 内分次加入）10g 无水硫酸钠，再 继续搅拌 10min （或加热到40℃，再在搅拌下慢慢地加入 50ml40℃左右的乙酸 缓冲液，直到 pH 达到 4.8 左右，将悬浮液冷却至室温，放置 5min）。 （3）将溶液用细布过滤，分别收集沉淀和滤液。沉淀悬浮于 30ml 乙醇中， 倾于布氏漏斗中，过滤出去乙醇溶液，抽干。将沉淀从布氏漏斗中移出，在表面 皿上摊开以除去乙醇，干燥后得到的是酪蛋白。准确称重。 2.等电点沉淀法制备乳蛋白素 （1）将制备酪蛋白操作步骤（3）所得滤液置于 100ml 烧杯中，一边搅拌， 一边利用 pH 计以浓盐酸调整 pH 至 3±0.1。 （2）将溶液倒入离心管中，6000r/min 离心 15min，倒掉上层液。 （3）在离心管内加入 10ml 去离子水，振荡，使管内下层物重新悬浮，并 以 0.1mol/L 氢氧化钠溶液调整 pH 至 8.5 ～9.0 （以pH 试纸或 pH 计判定），此时 大部分蛋白质均会溶解。 （4）将上述溶液以 6000r/min 离心 10min，上层液倒入 50ml 烧杯中。 （5）将烧杯置于磁搅拌加热板上，一边搅拌，一边利用 pH 计以 0.1mlo/L 盐酸调整 pH 至 3±0.1。 （6）将上述溶液以 6000r/