21植物组织与细胞培养技术.pptxVIP

Please be quiet, 上课了！！;第二章 植物组织与细胞培养;一、 植物组织培养定义;1、探索阶段（20世纪初至20世纪30年代） 1902年，德国植物学家哈伯兰德（Haberlanclt）就预言，植物细胞具有全能性，即高等植物的器官和组织可以不断分割，直至分到单个细胞的观点，并设想离体植物活细胞具有能够发育成为完整植株的潜在能力。 而且进行了相关实验：培养植物叶片细胞。 因此，被称为—— 植物组织培养的father ;2、奠基阶段（20世纪30年代中至50年代未）;1943年,white 正式提出了植物细胞具有全能性的学说. 1948年，Skoog和催澄在烟草茎段和髓培养以及器官形成的研究中发现，腺嘌呤或腺苷可以解除生长素（IAA）对芽形成的抑制作用，而诱导形成芽，从而确定了腺嘌呤/生长素的比例是控制芽和根形成的主要条件之一。 1956年，Miller发现了激动素后，用它代腺嘌呤的效果更好。 1958年，在美国工作的英国人Stewward，从胡萝卜愈伤组织和细胞培养中，诱导分化产生了个体植株，给“全能性”理论以科学论证。;3、迅速发展阶段（20世纪60年代至现在） 1960年，Cocking用真菌纤维素酶在番茄幼根分离得到大量活性原生质体，开创了植物原生质体和体细胞杂交研究工作。Kanta在植物试管受精研究中首次获得成功。 1960年，Morel用兰花茎尖培养实现了脱去病毒和快速繁殖方面已获成功，导致欧洲、美洲和东南亚等许多国家兰花工业的兴起。（茎尖-原球茎-小植株） 1962年Murashige和Skoog发表了促进烟草组织快速生长的培养基组成，这就是目前我们常用的MS培养基。 1964--1966年，印度的Guha和Maheshwari成功地在毛叶曼佗罗花药培养中由花粉诱导得到了单倍体植株。 1970年Power首次成功实现原生质体融合。1971年Takebe等首次由烟草原生质体获得再生植株，这一成功促进了体细胞杂交技术发展，同时也为外源基因导入提供了理想的受体材料。1972年，Carlson等通过原生质体事例首次获得了两个烟草物种的体细胞杂交种。 1978年Murashige提出了人工种子的概念。 20世纪80年代初，随着土壤农杆菌成功的用于植物遗传转化，植物基因工程开始成为研究的热点。1983年Zambryski首次用农杆菌转化烟草??获得首例转基因植物。; 三、特点;四、意义和应用;五 、 实验室、设备要求和实验室设计; 植物组织培养是在无菌的条件下进行离体植物材料培养的技术。要达到无菌操作和无菌培养， 首先是要有一定的无菌环境，使用无菌的容器和用具（经过灭菌处理的）进行无菌操作，将无菌的植物材料接种在无菌的培养基上， 然后把要培养的植物材料放在一定的温度、湿度、光照、营养条件下，使其生长、发育和繁殖，这就必须要有一定的设备和条件。;5．1 植物组织培养室的基本结构 选址： 在建造植物组织培养室时，应选择采光好、通风好、环境干净的地点，以利于组织培养的顺利进行和降低培养过程的污染率。 实验室：植物组织培养工作的开展除需要培养室外，还应该有与之配套的洗涤室、药品室、称量室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、细胞学实验室、暗室和物品存放室等。; ;;（3）称量室（天平室） 要求干燥、密闭，无直射光照，避免腐蚀性药品和水气直接接触。有固定的水磨石平台，安放普通天平和万分之一分析天平（电子天平），要有电源插座，最好设计在阴面的房间，这样对怕光药品的保存和称量有利，称量室紧邻培养基配制室较好，以方便配制母液和培养基。如房间较少时，可以与药品储藏室合二为一。;（4）培养基配制室 主要进行培养基的配制、分装和灭菌前的暂时存放。配制的培养基需要实验台，上下水，电源，加热设备等。 配制培养基室要求备有各种试管、三角瓶、烧杯、量筒、吸管等玻璃器皿，有安放药品和器皿的各种橱架、水浴锅、过滤灭菌装置和酸度计等。 规模较小时， 可与洗涤室合并在一起。;（5）培养基灭菌室 器皿和培养基的消毒灭菌，最好在一个专用的灭菌室内进行。由于采用高温高压蒸汽灭菌方法，灭菌室最好有排除蒸汽的排风扇等。建筑上要求其墙壁耐湿、耐高温。 有用于干热灭菌的烘箱、湿热灭菌的高压蒸汽灭菌锅、蒸馏水器、水源、水池，供、排水设施。 有用于灭菌的两相和三相电源或煤气加热装置，摆放和存放器皿和培养基的架子和橱柜。 规模小时，可与洗涤室和配培养基室合并。;（6）培养基存放室 灭菌的培养基最好存放一段时间后进行接种工作，以防污染和损失苗木。 规模小时，可与洗涤室、配培养基室和灭菌室合并。;（7）过度室（缓