分子生物学 第三章 DNA的复制.pptVIP

* * * * 大肠杆菌染色体的复制与细胞分裂同步，复制的终止引发细胞分裂， * * * 染色体水平的调控: 不同染色体或同一染色体不同部位的复制子按一定顺序在S期起始复制 复制子水平的调控： 即复制起始与否 转录活化 复制起始复合物的合成 引物合成等 * RNA-1 0 RNA-2 转录200-360Nt Rom gene expression RNA-1 / RNA-2 D.S. repression RNA-1 / RNA-2 不能形成primer的 3’-OH 促进 限 制 63 aa ROP (Rom protein) RNA-2 只能转录到100-220 bp, 不能到达“0”原点 不能形成primer 的3’-OH 0 RoP基因的负控制调节 第三章 DNA复制 第一节 DNA复制的基本特征 第二节 原核生物DNA的复制 第三节 真核生物DNA的复制 一、真核生物 DNA 复制特点: 二、真核生物 DNA 聚合酶特性 三、真核生物DNA的延伸 四、真核生物避免5’端缩短的机制 五、真核细胞 DNA 的复制调控 ★ 一个复制单元中含有多个复制子，即多复制起点 ★复制子较小：40-1000 kb/per replicon （复制子） ★复制叉的移动速率约50bp/s，大肠杆菌的1/20 ★真核生物染色体在全部完成复制之前，各起点上的DNA不能重新启动复制，而原核生物的复制起点上可以连续开始新 DNA 的复制 ★复制起点成为自主复制序列（ARS） ★需要起始点识别复合物（ORC）的参与 一、真核生物 DNA 复制特点: 二、真核生物 DNA 聚合酶特性 性质 DNA 聚合酶α DNA 聚合酶β DNA 聚合酶γ DNA 聚合酶δ DNA 聚合酶ε 亚基数 4 1 2 2~3 ≥1 功能 主要DNA复制酶 DNA复制（?） DNA引物合成 损伤修复 线粒体DNA复制 3’ 5’外切 无 无 有 有 有 5’ 3’外 切 无 无 无 无 无 核内 核内 线粒体 核内 核内（?） 在细胞内的分布 引发酶 高忠实性修复酶 DNA binding proteins Pol d Pol a primase DNA Pol 在复制叉上存在一个DNA聚合酶α /引发酶复合体和DNA聚合酶δ 三、真核生物的DNA延伸 前导链的合成 Pol a RNaseH DNA binding proteins Pol d ligase Pol d 后随链的合成 四、真核生物避免5’端缩短的机制 模板链可连续复制直到模板链的末端 真核生物通过形成端粒结构和具有反转录活性的端粒酶来防止DNA复制时后随链缩短而产生的染色体部分短缺 端粒酶能以自身携带的RNA链为模板，以反转录的形式催化合成后随链5’端DNA片段或外加重复单位 c) 真核生物染色体 DNA末端补齐模式 ● 端粒的发现 1938 Muller X-ray Drosophila 末端极少发生缺失和倒位 推测染色体两端存在特殊结构，使染色体趋于稳定. 并定名为Telomere 1938 B.McClintock 顶端缺失染色体易于融合，而正常染色体不易连接。 推测染色体末端具有特殊端粒结构。 1984 Elizabeth B 发现四膜虫大核中rDNA小分子末端端丽结构为370-520bp的（GGGGTT）n的重复片段 Telomeres (端粒) on chromosomes 真核生物染色体末端的特殊结构，由端粒酶合成 (GGGGTT)n n=20-200 pBR322 Pvu Bg1 ARS TEL TEL Bam H1 Bam H1 四膜虫rDNA Bg1 Pvu Bam H1 转化酵母 Pvu 传代 酵母TEL？！ Shampay J. Blackburn 加尾实验 转化酵母 传代 酵母TEL Pvu 酶切 连接 Pvu 酵母 DNA Pvu 酵母TEL 酵母TEL？！