厦大有机实验10.柱色谱.pdfVIP

柱色谱 柱色谱 柱柱色色谱谱 一、操作要点 一、操作要点 一一、、操操作作要要点点 色谱法是一种物理的分离方法。本实验的柱色谱为吸附色谱，吸附剂为中性氧化铝或 硅胶。 （一）、装置与安装 （一）、装置与安装 （（一一））、、装装置置与与安安装装 1、色谱柱 在实验室内进行色谱分离时，通常可用一根下端缩小的玻璃管作柱身。管的大小根据实 验条件及要求而定。管的直径与其高度之比一般为1∶20。 2、吸附剂 吸附剂一般以氧化铝为主，通常可分为碱性、中性及酸性三种。柱色谱用的氧化铝颗粒 大小一般为100～150目，粉末太粗，溶液流速太快，分离效果不好；粉末太细，流速太慢， 分离时耗时太长。氧化铝的活性分Ⅰ～Ⅴ五级，Ⅰ级为无水物，吸附作用太强，Ⅴ级含水15%， 吸附作用太弱，二者都不合适。最常用的是Ⅱ～Ⅲ级（含水分别为6%和10%）。 （二）、操作步骤及注意事项 （二）、操作步骤及注意事项 （（二二））、、操操作作步步骤骤及及注注意意事事项项 1、 选择色谱柱、吸附剂和洗脱剂。 2、 将色谱柱固定在铁架台上。 3、 装柱。 装柱的方法分为干法和湿法两种。 （1）湿法 湿法是将备用的溶剂或洗脱剂装入管内，然后将吸附剂和溶剂调成糊状，慢慢倒入管 中。此时应将管的下端活塞打开，使溶剂慢慢流出，吸附剂即渐渐沉于管底。加完吸附剂后， 继续使溶剂流出，直至吸附剂的沉降紧密。吸附剂中不能含有气泡。 （2）干法 干法是在管上端放一漏斗，使吸附剂均匀地经漏斗慢慢装入柱内。具体方法是： 装柱前先在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花，注意松紧要适度。太紧会影响洗脱速度。 这一步的目的是为了防止在洗脱过程中，可能存在的气泡上升而停在柱中间难于排出，如果 是这样将影响色带的均匀性和分离效果。然后在棉花上铺一层粗硅胶或加一块与柱内径略小 的滤纸片，这样可以防止洗脱过程中吸附剂泄漏。然后在柱内加一些溶剂或洗脱剂，打开活 塞，赶走所有的气泡。 再向柱中倒入一定体积的溶剂或洗脱剂，打开活塞，控制滴速为 1 滴／秒，用小锥型 瓶承接，同时通过漏斗慢慢装入一定量的吸附剂，使其逐渐沉入底部。靠不断滴出的溶剂产 生的吸力，将吸附剂吸紧。吸附剂必须成细流缓缓从漏斗中落入。这样，吸附剂与溶剂接触 时即自然分散并下沉，可以避免带入空气泡。否则，如果一次落入太多，往往会裹进空气泡。 遇到这种情况应停止加吸附剂，并通过震荡、敲打把气泡赶出。如果气泡上有较厚的吸附剂 层时，气泡则不易被赶出。 在装吸附剂的过程中，用质软的物体如试管夹、吸耳球等轻轻敲击柱身，目的是促使 吸附剂装填紧密，否则若松紧不均或出现缝隙将影响分离效果。但敲击时由于惯性的关系， 吸附剂容易向敲击方移动，使吸附剂呈斜面，分离时色带也易出现斜面。为了避免这种情况 发生，敲击要轻，而且要不断改变敲击方向，最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面。 有时落下的吸附剂没有垂直落入溶剂中，而是粘在被溶剂润湿的柱壁上，以致可能造 成吸附剂的堆积。此时应暂停加吸附剂，用玻棒捅下粘附的吸附剂，或是将柱身水平旋转， 使溶剂浸润吸附剂，让吸附剂自由滑落。等清除干净后，再加新的吸附剂。 有时因溶剂滴得太快，液面可能降至吸附剂层以下，容易造成吸附剂不紧密而引进气 泡。此时应补加溶剂，只要暂时关闭色谱柱活塞，将锥型瓶中承接的溶剂倒回再用即可，不 必用新的溶剂，因为此时的溶剂中不含溶质，不影响以后的分离。 加完吸附剂后，在吸附剂上再盖一张直径大小合适的小圆滤纸或一层海砂，以免在进样 或添加洗脱剂时，破坏吸附剂的平整，影响分离效果。 另一种方法是先将吸附剂倒入色谱柱中，然后用溶剂进行洗柱，将柱内的气泡全部赶出。 以后的步骤同上。 4、 加样 当溶剂的液面刚好流至滤纸面时关闭二通活塞，立即用移液管或滴管加入一定体积的已 配制好的待分离的混合物，并尽量避免待分离混合液粘附在柱的内壁上。若柱壁上粘有被分 离混合物，可用另一干净滴管滴入尽可能少的溶剂，以冲洗可能粘附在柱身上的溶液。目的 是使混合液体积尽可能小，使此后分离的色带也尽可能窄，避免色带重叠交叉，达到较好的 分离效果。 5、 洗脱 打开二通活塞，等柱内的溶剂恰好流到滤纸面时，关闭二通活塞，再向柱内加入选定溶 剂（洗脱剂），再次打开二通活塞进行洗脱，直至混合物分别被完全洗脱。必要时可采用