红树林细菌发酵产灵菌红素条件研究.doc

广西科学GuangxiSciences2010,17(4):373~376 红树林细菌发酵产灵菌红素条件研究* StudyontheFermentationConditionsofMangroveBac-teriaFlavobacteriumsp ProducingProdigiosin 何碧娟,姜发军,许铭本,雷 富,张荣灿,庄军莲 HEB-ijuan,JIANGFa-jun,XUMing-ben,LEIFu,ZHANGRong-can,ZHUANGJun-lian (广西科学院,广西南宁 530007) (GuangxiAcademyofSciences,Nanning,Guangxi,530007,China) 摘要:采用单因素试验和L9(34)正交试验研究从红树林中分离到的一株具有产灵菌红素的海洋细菌(Flavobacteriumsp )的发酵条件。结果表明,最佳培养基配方为麦芽糖10 0g/L,蛋白胨10 0g/L,磷酸氢二钾0 25g/L,硫酸镁0 1g/L,最合适pH值为6 0,最合适的盐度为10 ,最合适的温度为27 。关键词:红树林细菌 灵菌红素 发酵 培养基优化 中图法分类号:Q815 文献标识码:A 文章编号:1005-9164(2010)04-0373-04 Abstract:ThefermentationoftheprodigiosinbyFlavobacteriumsp screenedfrommangrovewasstudied,andtheoptimalconditionwasstudied Meanwhile,asetofexperimentsdesignedbytheorthogonalmethodwasadoptedtooptimizetheculturemediumelements Theresultshowedthattheoptimizedelementsofcultureare10 0%maltose,K2HPO4at0 25g/L,10 0%peptone,MgSO4at0 1g/L Inaddition,theoptimalgrowingconditionwasincluded:2%salinity,pH6,andtemperatureat27 Keywords:Flavobacteriumsp ,prodigiosin,fermentation,mediumoptimization 近年来,我国近海海水富营养化逐渐加剧,赤潮频繁发生并已日益严重,鉴于赤潮的严重危害性,有效防治赤潮技术的研究日益受到关注。用铜制剂、除草剂等化学杀藻剂可以直接杀死藻类,但是这些化学物质的专一性差,而且容易富集,在食物链中造成二次污染,因此,迫切需要开发一种见效快、用量少、对环境友好、储存和运输方便的除藻剂来解决赤潮和水华问题。灵菌红素是一类天然红色素家族的总称,是由多种放线菌和细菌产生的一类次级代谢产物[1,2]。最近,科学家[3]发现了一种杀藻海洋细菌,命名为Hahellachejuensis,这种海洋细菌也可以产生强烈杀灭赤潮的灵菌红素代谢。文献[4]报道沙雷氏菌的天然产物灵菌红素对引起海洋赤潮和淡水水华的有害藻类有很强的杀灭效果。广西科学院东盟海洋研究中心实验室从红树林细菌(Flavobacteriumsp )中提取得到一种活性 收稿日期:2010-06-12修回日期:2010-09-12 作者简介:何碧娟(1964-),女,副研究员,主要从事海洋生物研究。*广西自然科学基金项目(0832077)资助。 成分,它对亚历山大藻具有较强的杀灭效果,48h杀灭最大效果可达81 7%,对其进行分离纯化和分子结构鉴定,其杀藻活性物质为灵菌红素[5]。本文通过单因素试验和四因素三水平正交试验对红树林细菌培养基进行优化并对发酵条件进行研究,以期提高其发酵生产灵菌红素的量。 1 材料与方法 1 1 菌种及培养基 红树林细菌(Flavobacteriumsp )样品采自广西北海山口红树林,储藏于广西科学院东盟海洋研究中心。 平板和斜面培养基:葡萄糖10 0g,蛋白胨5 0g,陈海水1000ml,调pH值7 4,温度121 ,20min湿热高压灭菌;发酵基础培养基:基本成分同斜面培养基(不加琼脂),其中所要优化成分被代替。1 2 最适培养基及发酵条件优化 以发酵基础培养基为基础,分别以不同的碳源(乳糖、麦芽糖、甘露糖、果糖、蔗糖)替代葡萄糖,不同的氮源(豆粉、牛肉膏、胰蛋白胨、尿素、NH4Cl、 月 第174期 KNO3)替代发酵基础培养基中的蛋白胨,添加不同的无机盐进行单因素实验以确定最佳的碳源、氮源和无机盐。每种成分3个平行。根据单因素试验结果设计碳源、氮源、无机盐的四因素三水平的正交试验来选择最适培养基配