化学发光免疫分析技术的发展.ppt

化学发光免疫分析技术的发展 深圳市新产业生物医学工程有限公司 合肥兴科天合生物科技有限公司 报告人 : 饶微（博士）、汪竟成（经理） 概念 化学发光免疫分析是将灵敏的 化学发 光 或生物发光体系与特异的抗原抗体 免疫测定 结合于一体的检测技术 。 原理 化学发光 由于化学反应产生电子能级处于激发态的 物质，后者通过跃迁释放能量产生光子， 从而导致的发光现象。 免疫测定 是利用抗原抗体反应来测定标本中微量物 质的方法。 按化学反应类型 ? 酶促化学发光： 辣根过氧化物酶系统 碱性磷酸酶系统 黄嘌呤氧化酶系统 ? 非酶促化学发光： 吖啶酯系统 草酸酯系统 三价铁 - 鲁米诺系统 ? 闪光（ Flash ） : 按发光持续时间 发光时间在数十分钟以上，如： HRP-Luminol 系统 AP-AMPPD 系统 黄嘌呤氧化酶系统 无须原位进样、 以速率法测量。 发光时间在数秒内，如吖啶酯 以原位进样 (In Situ Injector) 和时 间积分法测量 ? 辉光（ Glow ） : 化学发光的分类 化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型 ? 第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物， 通过发光反应增强测定的敏感性； ? 第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记 物，直接通过发光反应检测标本中抗原或 抗体的含量。 化学发光免疫分析目前分类 按发光剂不同分为 1. 发光酶免疫测定技术（ CLEIA ） 2. 化学发光免疫测定技术 (CLIA) 3. 电化学发光免疫测定技术 (ECLIA) escence immunoassay 发光酶免疫测定技术（ CLEIA ） 属于酶免疫测定的一种。只是最后一步酶反应所用底物 为发光剂，通过发光反应发出的光在特定的仪器上进行测 定。 技术类型 根据酶促反应底物不同可分为 1. 荧光酶免疫测定技术 2. 化学发光酶免疫测定技术 根据免疫学反应模式分 1. 双抗体夹心法和双抗原夹心法 2. 固相抗原竞争法： 化学发光免疫测定技术（ CLIA ） 用化学发光剂直接标记抗原或抗体 , 与待测标本中相应 Ab 或 Ag 、磁颗粒性的 Ag 或 Ab 反应，通过磁场把结合状态（沉 淀部分）和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，然后 加入发光促进剂进行发光反应，通过对发光强度的检测进 行定量或定性检测 。 技术类型 1. 分离方法 常用磁颗粒分离技术 2. 免疫学反应模式 同酶发光免疫测定技术 3. 不同只是相应标记物是吖啶酯而不是酶 电化学发光免疫测定技术 （ ECLIA ） 是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应， 用化学发光剂三联吡啶钌 [Ru(bpy)3] 2+ 标记 Ab ，通过 Ag- Ab 反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的 光强度对待测的 Ag 或 Ab 进行定量。 技术类型 1. 分离方法 常用磁颗粒分离技术 2. 免疫学反应模式 同酶发光免疫测定技术 3. 相应标记物是三联吡啶钌而不是酶 发光免疫分析基本操作步骤（一步法） 待测样品 标记抗体或抗原 洗涤去除未结合的反应物 发光底物 仪器检测 包被抗体或抗原的反应管 反应 30-60 分钟 反应 0-5 分钟 发光免疫分析基本操作步骤（二步法） 待测样品 洗涤去除未结合的反应物 发光底物 仪器检测 包被抗体或抗原的反应管 反应 30-60 分钟 反应 0-5 分钟 标记抗体或抗原 洗涤去除未结合的反应物 反应 30-60 分钟 化学发光免疫分析的优点 1 、灵敏度高： 这是 CLIA 关键的优越性，其灵敏度可达 10 -16/-21 mol/L （ RIA 为 10 -12 mol/L