分子生物学常用仪器介绍2教学教案.ppt

Gene pulser X cell电穿孔系统 工作原理 电穿孔是功能强大的将核酸、蛋白及其它分子导入多种细胞的高效技术。 通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。 这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。 系统的组成 由一个主单元、2 个附属模块（CE 与PC 模块）及ShockPod 电击槽组成 CE 模块（电容扩增器模块）与主单元配合使用可电转化多数真核细胞（包括哺乳动物细胞和植物原生质 体）。 PC 模块（脉冲增强控制器模块）建议用于细菌和真菌的电转化，或其它需要在小体积和高电阻样品上施加高电压脉冲的应用。 系统有 3 种组合。 电击杯选择指南 0.4 cm 间距电击杯 宽间距、低场强、应用于哺乳动物细胞和其它真核细胞 0.2 cm 间距电击杯 窄间距、高场强、应用于酵母、细菌和其它真核细胞 0.1 cm 间距电击杯 最窄间距、极高的场强，浅底用于小体积样品(40–80 μl)应用于酵母和细菌转化 主要用途 用于哺乳动物细胞、胚胎细胞或植物原生质体的穿孔，可有效转移任何大小或复杂度的DNA、蛋白质，适用于原核细胞和真核细胞的转染，细菌和酵母的转化。 超低温冷藏柜 生物材料的冻存（1） 0—8℃ 疫苗保存箱 可用于储存疫苗、药剂、血液等2—8℃ 药品保存箱 药品保存箱是医疗行业冷藏药品的专业设备，也可用于储存生物制品4℃ 血液保存箱 医疗行业冷藏血液（全血）的专业冷藏设备，也可以用于冷藏药物，生物制品—25℃~ —40℃ 低温保存箱 可用于保存血浆，生物材料，疫苗、试剂等 生物材料的冻存（2） —40℃低温保存箱 可用于特殊材料的低温实验、冻存血浆、生物材料、疫苗等—60℃ ~ —70℃超低温保存箱 保存生物材料、血浆以及特殊材料的低温试验—86℃ 超低温保存箱 用于保存病毒、病菌、红细胞、白细胞、皮肤、骨骼、细菌、精液、生物制品，远洋制品，特殊材料的低温试验等—156℃ 深低温保存箱 用于保存病毒、病菌、红细胞、白细胞、DNA/ RNA、皮肤、骨骼、细菌、精液、生物制品临床试验品等。 ELX800酶标仪 主要用途 用于读取酶联免疫试剂盒的反应结果，可进行单克隆抗体筛分、抗生素灵敏度检验(食品安全药物残留快速检测)以及其它需要进行比色的分析。 酶标仪测定原理 在特定波长下，检测被测物的吸光值。 在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，称为测量波长。 但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收，为了消除这种非特异性吸收，我们再选取一个参照波长，以消除这个不准确性。在参照波长下，检测物光的吸收最小。 检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。  主要性能说明 速度：30秒/96孔板储存：储存55种测试项目，并能储存最近的8个测试结果，可储存25条标准曲线 滤光片：滤光轮可放5块滤光片， 仪器配405、450、490、630nm4块滤光片 线性：405nm，0-2.000Abs±1%450nm，0-2.000Abs±1%外接口：电脑接口（RS232）、打印机接口波长范围：400-750nm 具有单、双波长设定 吸光度范围：0.000-3.000Abs分辨率：0.001Abs 操作注意事项 A. 使用移液器加液，移液枪头不能混用。B. 洗板要干净，避免交叉污染。C. 严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。D. 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作 完成注意做好清洁工作。E. 不要在测量过程中关闭电源。F. 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应 根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。G. 使用后盖好防尘罩。 荧光定量PCR仪应用 定量检测 绝对定量：基因表达研究、转基因食品检测、病原体检测 相对定量：基因在不同组织中的表达差异、药物疗效考核 点突变检测 与疾病相关的等位基因点突变检测 SNP检测 Real Time PCR 原理 在PCR反应体系中加入荧光物质，并实时监测荧光信号积累的整个PCR进程，最后通过已知浓度的标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。 Real Time PCR 检测方法 荧光染料嵌合法(SYBR Green I) 荧光探针法 TaqMan probe Cycling probe Molecular Beacon probe Hybridization