临床免疫学检验 课件 第13章 流式细胞分析技术1.ppt

三、荧光测量 （一）荧光信号测量与放大器 荧光信号由被检细胞上标记的荧光抗体上的荧光素受激 发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。散射光和荧 光的强度决定了峰值脉冲信号的高度，荧光的分布则决定了 脉冲信号的宽度。这些光谱通过滤光片，不同波长的散射光 和荧光信号被分开，经 PMT 和 PD 检测后，信号经放大、转换 ，最后通过计算机分析获取流式结果。 流式检测示意图 （二）荧光补偿 荧光补偿是指不同的荧光素由于发射光谱重叠，因此 在检测的时候有串色现象，通过减去重叠部分的光，使检 测器检测到的光能量是真正的某一荧光素产生的光能量。 四、数据显示方式 （一）单参数数据的显示 单维参数（荧光或散射光）与细胞数量（ count ）构成 ，用于 FSC 、 SSC 和荧光（ FL1 ～ FLn ）等单参数的数据显示。 （二）双参数图 二维散点图、密度图和等高图 （三）多维参数的显示 假三维图和三参数点图 三参数以上的显示 主要要依据设门技术进行分析 （四）设门分析技术 Gate 设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图 的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样 本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。 Region 设置 : 区阈（ region, R ）与门 (gate, G