+++铜绿假单胞菌检测.ppt

荧光观察 紫外光（360±20nm）进行照射 4.确证性试验 （1）营养琼脂纯化 （2）氧化酶试验 （3）金氏B培养 （4）产氨试验 （1）营养琼脂纯化 ? 将需验证的可疑菌落划线接种营养琼脂培养基，于36℃±1℃培养 20h～24h，对可疑菌进行纯化。 （2）氧化酶试验 将最初显红褐色的菌落进行氧化酶试验，取2～3滴新鲜配制的氧化酶试剂滴到放于平皿里的洁净滤纸上。用铂金丝接种环或玻璃棒，将适量的纯种培养物涂布在预备好的滤纸上。在10秒内显深蓝紫色的视为阳性反应。 （3）金氏B培养 将纯化后呈红褐色的且氧化酶反应呈阳性的培养物接种于金氏B培养基上于36℃±1℃培养 24h～5d。每天需取出在紫外灯下检查其是否产生荧光性，将5d内产生荧光的菌落记录为阳性。 （3）金氏B培养 日光下观察 荧光下观察 阳性 阴性 阳性 阴性 铜绿假单胞菌的检测 假单胞菌属包括200余种菌。 多数为腐生菌，少数为植物和动物寄生菌，大多为条件致病菌。 假单胞菌属分布广泛，土壤、水和空气中均有存在。人类非发酵菌感染中，假单胞菌占70％～ 80％，主要为铜绿假单胞菌。 铜绿假单胞菌也是医院感染的主要病原菌。 WHO在HACCP的评估中明确指出铜绿假单胞菌是婴儿瓶装饮用水的危害指示菌，可造成婴儿腹泻。 尤其是抵抗力较差的老弱病幼孕人群，饮用含铜绿假单胞菌的瓶装水很可能导致疾病的发生。 普通人食入103~104个菌体细胞即可被侵害。 无芽孢，无夹膜，革兰氏染色后为红色，革兰阴性杆菌，有单鞭毛或丛鞭毛，运动活泼。菌体的大小为0.5～1μm×1.5～3.0μm，菌体笔直或弯曲。 铜绿假单胞菌的菌体形态 铜绿假单胞菌检测方法（滤膜法）  GB/T 8538-2008 饮用天然矿泉水检验方法 蓝/绿色菌落 铜绿假单胞菌阳性 铜绿假单胞菌阳性 铜绿假单胞菌阳性 红褐色菌落 检验程序 1.水样过滤 在100级的洁净工作台进行过滤操作。首先用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上，贴放在已灭菌的滤床上，固定好滤器，将250mL水样或稀释液通过孔径0.45μm的滤膜过滤，然后将过滤后的滤膜贴在已制备好的CN琼脂平板上，平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留着气泡。 2.培养 将平板置于36℃士 1℃恒温箱中培养48h， 并防止干燥。 培养20h～24h观察滤膜上菌落的生长情况并计数。 3、结果观察 ATCC27853阳性对照菌株 24h培养结果（阳性） ATCC25922阴性对照菌株 24h培养结果（阴性） 在CN琼脂上生长的菌落选择和验证步骤 备注：NT表示不用测试。