水中微生物的测定.pptVIP

实验 水中细菌总数的测定 实验目的 ? 掌握水样的采取方法。 ? 掌握水样细菌总数测定的方法；了解水源水 的平板菌落计数的原则。 ? 学习检测水中大肠菌群的原理和方法。 ? 了解大肠菌群数量与水质状况的关系。 ? 了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。 实验原理 ? 饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总 数和大肠菌群数来确定。 ? 细菌总数是指 1 毫升水样在一定的培养基平板 （普通琼脂培养基）中， 37 ℃ 24 小时培养后 所生长的菌落数，此值仅是一种近似值。一 般规定， 1 毫升自来水的总菌数不得超过 100 个。 ? 如果水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原 菌污染而引起伤寒、痢疾、霍乱等肠道病的流 行，但肠道病原菌在水中数量较少，又易变异 与死亡，故从水中特别是自来水中分离出病原 菌，常常有困难。 ? 而大肠菌群是肠道好氧菌中最普遍和数量最多 的一种，所以常将其作为粪便污染的标志，即 根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪 便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染 的可能性。一般规定每 1000 毫升自来水中大肠 菌群不超过三个。 实验材料 ? 普通琼脂培养基；乳糖蛋白胨发酵管； 3 倍浓 缩乳糖蛋白胨发酵管，复红亚硫酸钠培养基。 ? 无菌空瓶；灭菌水；灭菌培养皿、吸管、试 管。 ? 自来水、池水、河水或湖水 实验步骤 ? 水样的采取 自来水： 先将自来水龙头用火焰灼烧 3min ，再 开放水龙头水流 5min ，以灭菌三角烧瓶接取 水样。 池水、河水或湖水： 取距水面 10-15cm 的深层水样，将具 塞玻璃瓶瓶口向下浸入水中，然后翻转过来， 除去玻璃塞，盛满后将瓶塞盖好再从水中取 出。 ? 细菌总数测定 1 ）自来水 吸取 1ml 水样与平皿内冷却至 45 ℃的培 养基混匀，于 37 ℃下培养 24h 计数，共两 皿。同时做不接水样的空白皿对照试验。 2 ） 池水、河水或湖水 采用平板菌落计数法：一般中等污秽 水样，取 10 － 1 、 10 － 2 、 10 － 3 三个稀释度， 污秽严重的取 10 － 2 、 10 － 3 、 10 － 4 三个稀释 度。 最后三个稀释度的稀释水样重复上述 自来水的细菌测定试验。 水样稀释过程示意图 ? 菌落计数方法 （ 1 ）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。 若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 一半计数× 2 （ 2 ）选择平均菌落数在 30 ～ 300 之间的平板 只有一个符合此范围时 ，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在 30 ～ 300 间时 ，按两者菌落总数比值决定：比值小 于 2 ，取平均；比值大于 2 ，取较小的菌落总数。 （ 3 ）所有菌落数均大于 300 ，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 （ 4 ） 所有菌落数均小于 30 ，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 （ 5 ） 所有菌落数均不在 30 ～ 300 之间，以最接近 30 或 300 的 平均菌落数乘稀释倍数。 计算菌数落总数方法举例 例次 不同稀释的平均菌落数 两个稀释度 菌落数之比 菌落总烽（个 /ml ） 10 -1 10 -2 10 -3 1 1365 164 20 -- 16400 或 1.6 × 10 4 2 2760 295 46 1.6 37750 或 3.8 × 10 4 3 2890 271 60 2.2 27100 或 2.7 × 10 4 4 无法计数 1650 513 -- 513000 或 5.1 × 10 5 5 27 11 5 -- 270 或 2.7 × 10 4 6 无法计数 305 12 -- 30500 或 3.1 × 10 4 备注 两位 以后 的数 字采 取四 舍五 入的 方法 去掉 五、实验报告 1 ．结果 （ 1 ）自来水 平板 菌落数 1ml 自来水中细 菌总数 1 2 （ 2 ）池水、河水或湖水等 稀释度 10 -1 10 -2 10 -3 平板 1 2 1 2 1 2 菌落数