紫外吸收法测定核酸含量2课件.pptVIP

实验十六 紫外吸收法测定核酸含量 目的要求 学习紫外线（ UV ）吸收法 测定核酸浓度 的原理。 实验原理 核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、 嘧啶碱基具有共轭双健系统（－ C ＝ C 一 C ＝ C 一）， 能够强烈吸收 250~280nm 波长的紫外光。核酸 （ DNA ， RNA ）的最大紫外吸收值在 260nm 处。在 此波长处，核酸溶液的吸光率与其含量成正比关系， 可用于定量测定。 实验原理 采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定： 在 260nm 波长下，浓度为 1μg/mL 的 DNA 溶液其光 密度为 0.020 ，而浓度为 1μg/mL 的 RNA 溶液其光密 度为 0.024 。因此，测定未知浓度的 DNA （ RNA ）溶 液的光密度 OD260nm ，即可计算测出其中核酸的含 量。该法简单、快速、灵敏度高。 试剂和器材 1 ．试材：核酸样品 DNA 或 RNA 2 ． 主要仪器 ： （ 1 ）分析天平 （ 2 ）紫外分光光度计 （ 3 ）冰浴或冰箱 （ 4 ）离心机 （ 5 ）离心管（ 10mL ） （ 6 ）烧杯（ 10mL ） （ 7 ）容量瓶