抗生素微生物检定标准操作规程【精华】.docxVIP

抗生素微生物检定法?（上） 本法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。 抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。 测定结果经计算所得的效价，如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时，应调整其估计效价，重新试验（标准曲线法除外）。 除另有规定外，本法的可信限率不得大于5%。 ??管碟法 本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。 （一）? 基本设备、用具、试验材料及标准品 1.?????? 基本设备 （1）????? 抗生素效价测定实验室：室内应为半无菌，装有紫外线灯，有固定的效价测定台，台面要求水平、防震。该室应与稀释抗生素溶液的工作室隔离，以防止空气、地面污染抗生素。 （2）????? 超净工作台：超净工作台应放置在洁净工作室或半无菌室内。 （3）????? 抑菌圈面积测量分析仪：该仪器装有微处理机，可自动测量抑菌圈面积，并打印出统计分析的各种数据。 2.?????? 用具 （1）?????? 玻璃双碟：为硬质玻璃制品，碟底内径约90mm，碟高16~17mm，碟底面应平，厚薄均匀无凹凸现象。新购的双碟应按上述要求进行检查。检查时可将双碟底平放在水平台上，每碟内加入2ml染料液，仔细观察碟底反映的颜色深浅是否一致，挑选底部平的双碟，洗净晾干，置高温烘箱内140~160 ℃干热灭菌2小时后备用。 （2）?????? 陶瓦圆盖：应平，无凹凸现象。 （3）?????? 不锈钢小管：外径7.8±0.1mm，内径6.0±0.1mm，高10.0±0.1mm，重量差异不超过±25mg，钢管内外壁要求光洁，管壁厚薄要一致，两端面要平坦光洁。 （4）?????? 小钢管放置器：四孔和六孔各一台。 （5）?????? 游标卡尺：精密度0.02mm。 （6）?????? 滴管：管口应细长平滑，不得有缺口。 3.?????? 试验材料 （1）????? 培养基及其制备方法 以下培养基、缓冲液制备时，均以115℃灭菌30分钟。 培养基??? Ⅰ 胨?????????? 5g???????? 磷酸氢二钾???? 3g???????? 水??????? 1000ml 牛肉浸出粉?? 3g???????? 琼脂?????? 15~20g ???? 除琼脂外，混合上述成分，调节PH使比最终的PH值略高0.2~0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过（用纸浆减压滤过或纱布棉花滤过），调节PH值使灭菌后为7.8~8.0或6.5~6.6，分装，灭菌。 ???? 培养基??? Ⅱ 胨? ????????6g????????? 酵母浸出粉? ???6g???????? 琼脂????? 15~20g 牛肉浸出粉?? 1.5g??????? 葡萄糖???????? 1g???????? 水???????? 1000ml 除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节PH使比最终的PH值略高0.2~0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节PH值使灭菌后为7.8~8.0或6.5~6.6，分装，灭菌。 培养基??? Ⅲ 胨??????? 5g???????????? 氯化钠?????? 3.5g?????????? 葡萄糖??????? 1g 牛肉浸出粉??? 1.5g?????? 磷酸氢二钾????? 3.68g??????? 水????? 1000ml 酵母浸出粉??? 3g???????? 磷酸二氢钾????? 1.32g 除葡萄糖外，混合上述成分，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节PH值使灭菌后为7.0~7.2，分装，灭菌。 培养基??? Ⅳ 胨????????? 3g?????????? 酵母浸出粉???????? 3g????????? 水??????? 1000ml 葡萄糖????? 1g???????? ??琼脂??? ?????????15~20g 除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节PH使其比最终的PH值略高0.2~0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节PH值使灭菌后为6.5~6.6，分装，灭菌，趁热斜放使凝固成斜面。 培养基??? Ⅴ 胨??????????? 6g??????? 酵母浸出粉????????? 2g???????? 琼脂??????? 15~20g 牛肉浸出粉??? 2g??????? 葡萄糖????????????? 3g???????? 水????????? 1000ml 除琼脂和葡萄糖外，混合上述成分，调节PH使其比最终的PH值略高0.2~0.4，加入琼脂，加热溶化后滤过，加葡萄糖溶解后，摇匀，调节PH值使灭菌后为7.8~8.0，分装，灭菌