第九章-突变体的诱导与选择.pptVIP

20 第九章 突变体的诱导与选择 一、突变体选择的概念 组织培养筛选突变体（mutatin)方法，又称离体筛选。一类细胞组织培养过程中表现出的变异，Larkin和Scowcroft（1981）首次将这种变异称体细胞无性系变异（somaclonal variation);另一类在培养基中加选择压（化学物质）诱导产生变异，具有定向突变特征。 植物细胞工程目前分为五个分支： 脱毒与快速繁殖。 细胞的大量培养。 体细胞杂交。 细胞遗传转化及产生转基因植株。 无性系变异与分离突变体。 前两者主要利用遗传自动调节，本身遗传潜力进行繁殖； 后三者则主要利用遗传变异，创建新种质。 二、变异的类型 1. 农作物的品质改良 Chal effand carlson（1975）进行了高赖氨酸水稻突变体筛选的研究，采用甲基磺酸乙酯，S-（2-氨乙基）-半胱氨酸为选择因子，得到的突变体中，蛋氨酸含量增加14%；游离天冬氨酸增加17%；游离异亮氨酸和亮氨酸比野生种增加4～8倍。 Hibberd等（1987）用高浓度苏氨酸和赖氨酸为选择剂，得到了抗这两种氨基酸的玉米突变体，在愈伤组织中，其苏氨酸比正常细胞高6倍，在种子中提高75～100倍。 2.抗病突变体 当病原菌侵染植物组织后往往会产生一种毒素，破坏寄主细胞正常的代谢，严重的甚至导致细胞的死亡。病原毒素一般为一些次生产物，如糖苷、萜类、酚类或氨基酸类似物等。在培养基内加入某种病原毒素可淘汰不抗病的细胞，筛选出可以抗病的细胞。 Carlson（1973）以烟草野火病类似物蛋氨酸-亚砜亚胺（MSO）为选择因子，并获得烟草抗野火病突变体。MSO和细菌野火病毒素一样，在烟草叶片上产生相同的缺绿斑点，抗病突变的再生植株具有抗该细菌感染的能力。 Gengenbach等用玉米长蠕孢小种产生的可导致玉米叶苦病的T毒素，在对T毒素敏感和雄性不育的玉米愈伤组织中，筛选到抗T毒素和雄性可育的玉米。 3 抗除草剂突变体 选择专一和广谱的抗除草剂作物新品种，是现代农业生产发展的需要，也是育种工作中主要的育种目标之一。要得到抗除草剂新品种可通过突变体筛选途径，也可通过转基因技术的达到。 抗除草剂突变体的选择，主要根据除草剂对植物（杂草）生理生化过程的特异的酶的作用，在抗除草剂作物中对这些除草剂不敏感或有同工酶的产生，从而使除草剂对杂草产生毒害，对作物无害，达到除草的目的。 Magha等（1996）从烟草、番茄的组织培养中筛选出抗百草苦、磺酰基脲类除草剂细胞系；玉米对咪唑啉酮胺类的抗性的细胞系。 .4 抗逆突变体 耐盐突变体的筛选是通过在培养基中加入高盐浓度，甚至海水来进行的。在盐浓度逐渐增加的条件下，诱导并筛选出耐盐的细胞系。 Dix和Steet（1975）利用加入NaCl的液体培养基，培养辣椒和烟草，结果得到一种可在含1%～2% NaCl条件下生存的抗盐突变细胞株，培养几代在回到含盐培养基中，仍具有抗盐性。在抗盐细胞中游离脯氨酸积累量增加，表明脯氨酸与植物抗盐性的关系。 Dix和Steet用辣椒愈伤组织细胞进行悬浮培养，用甲基磺酸乙酯（EMS）作为诱变剂，在0～-3℃条件下，得到两个抗低温的突变细胞系。 三、变异的来源 1 .离体培养细胞的自发突变 组织培养后植株变异的原因： 源植株中预先存在的变异表达。 组织培养过程中引起的可遗传的变异。 植株的再生方式、生长调节物质、继代培养的时间。 由外源遗传及生理作用引起的变异 植物的细胞、组织、在离体培养时，由于环境条件可以人为控制和培养基中化学因素的影响，会发生各种各样的变异，外植体体细胞发生的变异称为体细胞变异 体细胞无性系变异的特征表现在：随机性，无法精确地分批重复。再生植株的遗传变异性广，包括染色体变异畸变，点突变，DNA序列的扩增、缺失和转座，以及线粒体和叶绿体基因组的改变等。 Heinz等（1969）观察到，由甘蔗细胞培养得到的愈伤组织，其形态学、细胞遗传学及同工酶谱有很大的变化。再生植株中分离出了若干亚无性系，表现出较强抗眼点病和裴济病（Fiji）能力。 Shepard等 （1980）得到1000个马铃薯原生质体无性系，有60个无性系表现出稳定的有利变异。株形紧凑，块茎早熟，块茎表面光滑，大小均匀一致，白皮，抗早疫病和晚疫病等。 大野(Oono ，1978)在水稻愈伤组织培养诱导的800个再生植株中，有70%发生形态、叶绿素含量及育性等指标的变异； Ahloowalia（1982）首先报道了小麦体细胞无性系变异的现象，得到了矮杆、分蘖数、抽穗期、白粒等具有明显经济价值品种，有些变异性状已确定是单基因突变的结果。 2. 人工诱发突变 物理方法：主要有X射线，r射线处理，32P、1